《化妆品安全技术规范 2022年版》（征求意见稿）数据分享No.5
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《化妆品安全技术规范 2022年版》（征求意见稿）中部分检测项目较2015版有变更和新增，今天的推送中介绍了大曹三耀实验室使用征求意见稿中的方法对氟康唑等9种原料的分析数据。
氟康唑等9种原料 参考征求意见稿中氟康唑等9种原料的LC-MS分析方法，使用CAPCELL PAK C8 DD S5; 2.0×150 mm色谱柱，对除了环吡酮胺外的8种化合物进行了分析。同时，为更快的完成分析，我们使用CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1×50 mm色谱柱摸索了UHPLC-MS的分析方法，可在5 min内完成所有物质检出，重复性及峰形良好。 标准品分析 如图1所示，氟康唑峰保留时间3.35 min，酮康唑峰保留时间3.37 min，萘替芬峰保留时间3.38 min，联苯苄唑峰保留时间3.55 min，益康唑峰保留时间3.61 min，克霉唑峰保留时间3.72 min，咪康唑峰保留时间3.72 min，灰黄霉素峰保留时间4.74 min。 图1 标准品分析色谱图 【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5; 2.0×150 流动相：A，0.1%乙酸-水；B，0.1%乙酸-乙腈 B% 15%(0min)-15%(1min)-45%(2min)-60%(4min)-80%(4.8min)-15%(5min)-15%(9min) 流 速：0.4 mL/min 柱 温：30 ℃ 检 测：AB SCIEX QTRAP 5500; POSITIVE，喷雾电压4000 V，离子源温度350 ℃ 样 品：600 ppb 进样量：2 μL 混合标准储备溶液：分别称取氟康唑、酮康唑、萘替芬、联苯苄唑、益康唑、克霉唑、咪康唑、灰黄霉素各10 mg（精确到0.1 mg）置于同一10 mL容量瓶中，加乙腈使溶解并定容至刻度，即得浓度为1 mg/mL的混合标准储备溶液。 混合标准系列溶液：取混合标准储备溶液，用乙腈分别配制得浓度为10、25、50、100、300、500 μg/mL的混合标准系列溶液。 未衍生化标准系列溶液：称取水0.5 g（精确到0.001g），置于25 mL具塞比色管中，分别加入混合标准溶液50 μL，用乙腈定容至刻度， 即得浓度为20、50、100、200、600、1000 ng/mL的未衍生化标准系列溶液，用于测定除环吡酮胺外的8种原料。 标准曲线绘制 在上述实验条件下，参考规范中的处理方法，用乙腈将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液，依次由低浓度向高浓度进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线，测试结果如表1所示。标准曲线在0.02~1.00 μg/mL浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9911~0.9992，均大于0.99，满足标准要求。 表1 氟康唑等8种化合物的线性方程、线性范围和相关系数 实际样品分析 在上述条件下，对化妆水、乳液、面霜化妆品样品进行分析（样品按规范标准中处理），结果如图2~4所示，经过保留时间及离子丰度比对比确定三种化妆品样品中均不含这8种化合物。 图2 化妆水样品分析色谱图 图3 乳液样品分析色谱图 图4 面霜样品分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5; 2.0×150 流动相：A，0.1%乙酸-水；B，0.1%乙酸-乙腈 B% 15%(0min)-15%(1min)-45%(2min)-60%(4min)-80%(4.8min)-15%(5min)-15%(9min) 流 速：0.4 mL/min 柱 温：30 ℃ 检 测：AB SCIEX QTRAP 5500; POSITIVE，喷雾电压4000 V，离子源温度350 ℃ 样 品：600 ppb 进样量：2 μL 样品处理：称取样品0.5 g（精确到0.001 g），置于25 mL具塞比色管中，加入饱和氯化钠溶液1 mL，涡旋30 s，加入乙腈1 mL，涡旋30 s， 加入乙腈20 mL，涡旋30 s，超声提取30 min，涡旋30 s，加入乙腈定容至刻度，4500 rpm离心5 min，取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为未衍生化待测溶液，用于测定除环吡酮胺外的8种原料。 快速分析方法建立 《化妆品安全技术规范2022版》（征求意见稿）原条件中整体分析时间为9 min，时间略长。为满足日常样品的快速分析，我们将色谱柱更换为UHPLC规格的CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1×50 mm，并优化梯度条件来缩短分析时间。 最终混合标准品分析结果如图5所示，可在5 min内完成所有物质检出，重复性及峰形良好。 图5 标准品快速分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱：CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1×50 流动相：A，0.1%乙酸-水；B，0.1%乙酸-乙腈 B% 10%(0min)-10%(0.5min)-45%(1min)-80%(2.4min)-10%(2.5min)-10%(5min) 流 速：0.4 mL/min 柱 温：30 ℃ 检 测：AB SCIEX QTRAP 5500; POSITIVE，喷雾电压4000 V，离子源温度350 ℃ 样 品：50 ppb 进样量：2 μL 混合标准储备溶液：分别称取灰黄霉素、酮康唑、克霉唑、益康唑、咪康唑、氟康唑、联苯苄唑、萘替芬各10 mg（精确到0.1 mg）置于同一10 mL容量瓶中，加乙腈使溶解并定容至刻度，即得浓度为1 mg/mL的混合标准储备溶液。 混合标准系列溶液：取混合标准储备溶液，用乙腈分别配制得浓度为10、25、50、100、300、500 μg/mL的混合标准系列溶液。 未衍生化标准系列溶液：称取水0.5 g（精确到0.001 g），置于25 mL具塞比色管中，分别加入混合标准溶液50 μL，用乙腈定容至刻度，即得浓度为20、50、100、200、600、1000 ng/mL的未衍生化标准系列溶液，用于测定除环吡酮胺外的8种原料。 综上，在《化妆品安全技术规范2022版》（征求意见稿）原条件下，使用CAPCELL PAK C8 DD S5; 2.0×150 mm色谱柱，可得到氟康唑等8种化合物标准品及3种化妆品样品的良好分析结果，经过LC-MS监测离子的丰度比对比确认化妆品样品中不含这8种禁用物质。同时我们也摸索了UHPLC分析方法，使用CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1×50 mm规格色谱柱，可在5 min内得到氟康唑等8种化合物标准品的良好分析结果。 氟康唑等9种原料 推荐用柱 F90964 CAPCELL PAK C8 DD S5; 2.0×150 快速分析 推荐用柱 F92885 CAPCELL PAK C18 IF2 S2; 2.1×50
