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NQAD在蛋白类化合物分析中的良好案例介绍

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随着研究的不断深入,研究者们对于样品的检测方法也越来越多样,除了最常见的UV、RI等检测器以外,气溶胶检测器逐渐被人们认识并被广泛使用,中国药典中也已收录使用气溶胶检测器的项目。

 

通用型气溶胶检测器-水凝粒子激光计数检测器NQAD

NQAD作为气溶胶检测器的一种,适用于几乎所有物质(挥发性物质除外)的检测,如缺乏紫外吸收的物质(如:表面活性剂、脂肪酸、磷脂、胺类、氨基酸、甾类化合物、胆固醇、蛋白质、肽类、糖类、金属离子型化合物等)均可以使用NQAD进行高灵敏度检测。
同时,在对于一些有紫外吸收的蛋白类化合物的分析中,NQAD检测器因其独特的质量型响应的特点,也表现出更好的检测效果,可以为液相色谱工作者们提供更好的帮助。

胎球蛋白是一种糖蛋白,通过胰蛋白酶进行酶处理后,会生成键合了糖链的多肽和不键合糖链的多肽。上图是PDA检测得到的色谱图,下图是NQAD检测得到的色谱图,在这个应用例中,是将NQAD和PDA串联起来进行检测的。

因为糖蛋白的糖链部分UV吸收弱,相对摩尔重量大,所以使用NQAD检测,要比PDA灵敏度更高。因此,使用NQAD,更容易检测出糖蛋白。对于合成糖蛋白以及进行基础研究的用户,这个数据值得参考。

 

 

因为,NQAD检测器没有检测池,对样品经喷雾-蒸发-凝结后的水凝粒子进行计数,所以,在相同的液相条件下,NQAD相比PDA检测器可获得更高的理论塔板数。

以6种标准蛋白的分析为例,在相同的液相条件下,NQAD检测器可获得PDA检测器2倍的理论塔板数。

   

[色谱条件]
色谱柱: Proteonavi ; 4.6 mm i.d. x 150 mm
流动相: A) 0.1 vol% TFA , B) CH3CN
  B 20% (0 min) → 70% (25 min)→ 20% (25.1 min)→ 20% (40 min) 
流速: 1.0 mL/min
柱温: 40 ℃
检测器: NQAD 5600, PDA 220 nm 
进样量: 10 μL
样品: 1. 核糖核酸酶A(13.7 kDa) ,2. 细胞色素C(12.4 kDa),3. 溶菌酶(14.3 kDa)
4. 牛血清白蛋白(69.0 kDa) ,5. 肌红蛋白(17.0 kDa),6. 卵清蛋白(45.0 kDa),各10 mg