即将执行2.16化妆品中丙烯酰胺的检验方法 的CP柱数据分享HPLC & UHPLC
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近日，国家药品监督管理局发布了“国家药监局关于将油包水类化妆品的pH值测定方法等21项制修订项目纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2023年第41号）”。 对《化妆品安全技术规范（2015年版）》中原有的5项检验方法进行了修订，自2024年3月1日起，化妆品注册、备案及抽样检验相关检验应当采用新发布的检验方法。 新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。 今天给大家带来的是“化妆品中丙烯酰胺的检验方法”的数据分享。 丙烯酰胺属于化妆品禁用物质，即不得添加使用。但丙烯酰胺作为化妆品原料聚丙烯酰胺的分解残留物常存在于化妆品当中，丙烯酰胺具有神经毒性、生殖毒性和致癌作用，所以法规中对聚丙烯酰胺有明确的限用加量。 在检验方法原条件下，使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，可得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果，四种化妆品样品中均不含丙烯酰胺，符合要求。 使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1×150 mm和CAPCELL PAK ADME-HR S2; 2.1×100 mm色谱柱，在原条件基础上对梯度条件进行优化后，可在5 min内完成检测，同样可以得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果。 化妆品中丙烯酰胺的检验方法原条件 参考检验方法中丙烯酰胺LC-MS分析方法，使用核壳型CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，对丙烯酰胺标准品及化妆品样品进行分析。标准品分析结果如图1所示，丙烯酰胺保留时间5.89 min，保留及峰形良好。 图1 丙烯酰胺标准品分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱：CC C18 S2.7; 4.6×150 mm 流动相：A：0.05%甲酸 B：甲醇 B% 10%(0min)-10%(8min)-100%(8.5min)-100%(12min)-10%(13min)-10%(19min) 流动速：0.3 mL/min 柱动温：室温 检动测：AB SCIEX QTRAP 5500 样动品：10 ppb 进动量：10 μL 在上述条件下进行线性实验的考察。结果如图2所示，丙烯酰胺在2.0~200 ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数r=0.999＞0.995，满足标准要求。 图2 丙烯酰胺线性 在上述条件下对化妆水、乳液、面霜、BB霜等化妆品样品进行分析（样品处理：称取样品0.3 g，加水3 mL、石油醚3 mL，涡旋1 min，超声处理10 min，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液1 mL，加5%甲酸溶液20 μL，石油醚1 mL，涡旋30 s，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液，过0.22 μm微孔滤膜，滤液作为待测溶液），结果如图3所示，四种化妆品样品在5.89 min左右均有不同程度的响应，但经过监测离子的丰度比对比确定四种化妆品样品中不含丙烯酰胺。 图3 不同样品分析结果 快速分析方法建立 为进一步节省分析时间，进行快速分析，在原流速0.3 mL/min不变的情况下更换2.1内径色谱柱，对分析梯度条件进行优化后，分别使用CAPCELL CORE C18和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，对丙烯酰胺标准品进行分析。 结果如图4、5所示，两支色谱柱均可在5 min内完成整体分析，其中150 mm柱长的CORE C18色谱柱分析丙烯酰胺保留时间1.36 min，柱长100 mm的ADME-HR色谱柱分析丙烯酰胺保留时间1.77 min。 图4 丙烯酰胺标准品分析色谱图 CORE C18 图5 丙烯酰胺标准品分析色谱图 ADME-HR 【色谱条件】 色谱柱：CC C18 S2.7; 2.1×150 谱谱谱：CP ADME-HR S2; 2.1×100 流动相：A，0.05%甲酸；B，甲醇 B% 5%(0 min)-5%(2 min)-100%(2.1 min)-100%(3min)-5%(3.1min)-5%(5min) 流动速：0.30 mL/min 柱动温：室温 检动测：AB SCIEX QTRAP 5500 样动品：10 ppb 进样量：10 μL 在上述条件下进行线性实验的考察。结果如图6、7所示，丙烯酰胺在2.0~200 ng/mL浓度范围内线性良好，CORE C18色谱柱分析结果中相关系数r=0.9993＞0.995，ADME-HR色谱柱分析结果中相关系数r=0.9963＞0.995，均满足标准要求。 图6 CORE C18-2.1 图7 ADME-HR-2.1 在上述条件下对化妆水、乳液、面霜、BB霜等化妆品样品进行分析（样品处理：称取样品0.3 g，加水3 mL、石油醚3 mL，涡旋1 min，超声处理10 min，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液1 mL，加5%甲酸溶液20 μL，石油醚1 mL，涡旋30 s，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液，过0.22 μm微孔滤膜，滤液作为待测溶液），结果如图8、9所示，分析结果经过监测离子的丰度比对比确定四种化妆品样品中不含丙烯酰胺。 图8 样品分析结果 CORE C18-2.0 图9 样品分析结果 ADME-HR-2.0 结 论 综上，在检验方法原条件下，使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，可得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果，四种化妆品样品中均不含丙烯酰胺，符合要求。 使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1×150 mm和CAPCELL PAK ADME-HR S2; 2.1×100 mm色谱柱，在原条件基础上对梯度条件进行优化后，可在5 min内完成检测，同样可以得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果。
