头孢地嗪钠中有关物质II的测定 参考《中国药典》(2020年版)
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头孢地嗪钠是一种β-内酰胺类抗生素,为半合成第三代头孢霉素药物,对革兰氏阳性菌和阴性菌均有一定抗菌活性。
头孢地嗪钠
本实验按照《中国药典》(2020年版)二部中头孢地嗪钠有关物质II项下方法,使用两款分子排阻色谱柱对其进行了分析。
1. CAPCELL PAK SEC250 S5;7.8mm i.d.×300mm色谱柱分析结果
首先,使用CAPCELL PAK SEC250 S5;7.8mm i.d.×300mm色谱柱按照药典方法进行了分析。系统适用性溶液、供试品溶液、对照品溶液分析结果分别如图1-3所示,系统适用性溶液色谱图中,头孢地嗪峰与其前相邻降解杂质峰之间的分离度为3.07,满足基线分离要求。
图1 系统适用性溶液分析结果(图上所示数字为分离度)
图2 供试品溶液分析结果(图上所示数字为分离度)
图3 对照品溶液分析结果(图上所示数字为不对称因子和理论塔数板)
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK SEC250 S5; 7.8×300
流动相:磷酸盐缓冲液(pH 7.0)[0.005 mol/L磷酸氢二钠溶液-0.005 mol/L磷酸二氢钠溶液(61∶39)]-乙腈(95∶5)
流 速:800 µL/min
温 度:30 ℃
检 测:PDA 231 nm
进样量:20 µL
供试品溶液:0.5 mg/mL(水溶)
对照品溶液:5 µg/mL(水溶)
系统适用性溶液:取供试品溶液10 mL,加0.1 mol/L氢氧化钠溶液1 mL,室温放置10 min,再加0.1 mol/L盐酸溶液1 mL,摇匀。
2. CAPCELL PAK SEC125 S5;7.8mm i.d.×300mm色谱柱分析结果
继续使用CAPCELL PAK SEC125 S5;7.8mm i.d.×300mm色谱柱按照药典方法进行了分析。系统适用性溶液、供试品溶液、对照品溶液分析结果分别如图4-6所示,系统适用性溶液色谱图中,头孢地嗪峰与其前相邻降解杂质峰之间的分离度为3.60,满足基线分离要求。
与SEC250色谱柱结果相比,SEC125色谱柱对主峰前杂质分离度更高,但对照品峰型上略拖尾。
图4 系统适用性溶液分析结果
图5 供试品溶液分析结果
图6 对照品溶液分析结果(图上所示数字为不对称因子和理论塔板数)
【色谱条件】
色谱柱:CAPCELL PAK SEC125 S5; 7.8×300
流动相:磷酸盐缓冲液(pH 7.0)[0.005mol/L磷酸氢二钠溶液-0.005mol/L磷酸二氢钠溶液(61∶39)]-乙腈(95∶5)
流 速:800 µL / min
温 度:30 ℃
检 测:PDA 231 nm
进样量:20 µL
供试品溶液:0.5 mg/mL(水溶)
对照品溶液:5 µg/mL(水溶)
系统适用性溶液:取供试品溶液10 mL,加0.1 mol/L氢氧化钠溶液1 mL,室温放置10 min,再加0.1 mol/L盐酸溶液1 mL,摇匀。
综上所述,使用CAPCELL PAK SEC 125/250 S5;7.8mm i.d.×300mm色谱柱,按照《中国药典》(2020年版)二部中头孢地嗪钠有关物质II项下方法,能够获得良好分析结果,主峰和主峰前杂质分离符合基线分离要求。
附:以下内容为分析过程中的讨论与对比,供实验参考
(1)系统适用性溶液破坏时间
我们分别尝试了使用0.1 mol/L氢氧化钠溶液破解0min、10min、30min后中和,对比分析结果如下所示。主峰前杂质整体变化不大,但是保留时间为8min峰峰面积明显增加。同时主峰后杂质峰面积也有所变化。
附图一:不同破解时间
(2)过渡及冲洗
色谱柱使用前,使用水在0.5 mL/min流动相条件下进行过渡(2h),随后使用流动相在0.8 mL/min流动相条件下平衡(1h)后连续进样,保留时间基本一致(第一针保留时间11.572→第五针保留时间11.545,差别<0.2%)。
注意更换流动相时,流速缓升缓降。
附图二:连续进样结果