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Nucleonavi

“核苷时代”玻璃包覆棒状色谱柱 ~核酸•核酸医药分析专用色谱柱~

药物直接作用的对象是蛋白质、核酸、脂质等分子。特别是蛋白质和核酸等分子,在生命活动中起着至关重要的作用。通过从分子水平理解药物的作用,现代医药正逐步向利用抗原抗体反应的抗体医药及核酸医药等更具特异性的药物转移。但是,目前使用HPLC-MS和HPLC对合成RNA和合成DNA进行分析仍会遇到困难,为什么合成RNA、合成DNA的分离会如此困难呢?主要有以下几个原因:
◆ 分子量高
◆ 即使只有一个核苷酸没有被识别也不能得到分离
◆ 必须能够识别4种碱基的不同组合方式
◆ 样品容易发生水解

 

针对以上情况,我们开发了具有全新结构的核酸•核酸医药分析专用色谱柱——玻璃包覆棒状色谱柱Nucleonavi——“核苷时代”。

 

Nucleonavi的新形状

采用多孔结构的整体型硅胶,进而使用相同材质的玻璃进行包覆,实现整体柱与玻璃管的一体化,消除间隙,进一步提高了分离能力。

 

 
玻璃包覆棒状色谱柱Nucleonavi的特长:

 

具有识别不同碱基链长和结构的高分离能力
可在低压下测定的构造
样品吸附少,回收率高
内径仅为1 mm,因而对少量样品也能得到高效利用
不含金属成分

合成RNA的检量线(玻璃包覆棒状色谱柱与粒子填料型色谱柱的比较)

下图为细孔径不同的粒子填料型色谱柱对合成RNA的检量线的比较。所有粒子填料型色谱柱均发生了样品吸附现的象,且检量线未能通过原点,因而对低浓度样品的分析会非常困难。与此相对,使用Nucleonavi进行分析时,不仅能得到良好峰形,也得到了通过原点的直线型检量线。

 

 

系 统:NANOSPACE

色谱柱:Nucleonavi ; 1.0 mm i.d. × 250 mm

流动相:A) 5% CH3CN, 100 mmol/L TEAA (pH 7)

    B) 90% CH3CN, 100 mmol/L TEAA (pH 7)

    B 0→50% (30 min) Gra.

流 速:50 μL/min

温 度:40℃

检 测:UV 260 nm

进样量:0.5 μL

碱基长度不同的寡脱氧胸腺苷酸的分析例

为考察对不同碱基长度的识别能力,对市售的寡脱氧胸腺苷酸进行分析,其中Nucleonavi比粒子型填料色谱柱的保留时间短,同时分离效果更好,与现有的粒子型填料色谱柱相比,Nucleonavi对于相同结构核酸的一个碱基长度的差异具有优越的识别能力,从分离出的色谱峰数量来看,也能体现其对核酸类的突出分离能力。

 

 

色谱柱:1.0 mm i.d. × 250 mm

流动相:A) 10% CH3CN, 100 mmol/L TEAA (pH 7)

    B) 30% CH3CN, 100 mmol/L TEAA (pH 7)

    B 0→20% (30 min) Gra.

流 速:50 μL/min

温 度:40℃

检 测:UV 260 nm

进样量:0.5 μL

样 品:0.5 mg/mL ( total ) in H2O

产品一览表

■Nucleonavi

 

产品编号 细孔径
(nm)
大孔径
(μm)
内径
(mm)
柱长
(mm)
耐压
(MPa)
F8105 20 1.5 1.0 50 15
F8109 20 1.5 1.0 250 15
 

 

Nucleonavi高效液相色谱柱使用说明书

 

在此,非常感谢您选购我公司的Nucleonavi色谱柱。
Nucleonavi是多孔结构的二氧化硅整体柱,专用于核酸及核酸医药的分析。它具有识别不同碱基链长和组成的高分离能、在低压条件下也可进行测定、不使用金属等优点,能够抑制核酸样品的吸附。
为了能够长期且稳定地使用Nucleonavi色谱柱,请在熟读该使用说明书后进行正确使用。

色谱柱的使用

本色谱柱除接口部分外均为玻璃材质,使用时请注意以下几点。
1.为了避免跌落或碰撞引起破损的危险,请小心谨慎使用。
2.请在压力指示(泵的压力示数等)为0时进行色谱柱的安装和拆卸。
3.色谱柱的最大使用压力为20 MPa,通常情况推荐在15 MPa以下使用。
4.色谱柱的玻璃外壳(参照图1)内出现液体积存状态时,请立刻停止使用。玻璃包覆结构可能出现了破损。如果继续使用,可能会造成外壳破裂的危险。

图1 Nucleonavi (250 mm长)的色谱柱整体图

色谱柱的安装

1.色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。请使用PEEK制的配管并确保装置的配管接头正确连接,特别是锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图2)。
2. 安装色谱柱之前,请将装置配管内的液体置换成所用的流动相。
※色谱柱出厂时用乙腈封存,置换时请注意不要造成盐析。
3. 请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱。
4.安装色谱柱时,将两侧的密封堵头取下,拿紧色谱柱入口侧接口处(PEEK制),将PEEK配管插入色谱柱内侧。如果拿着玻璃外壳或出口侧接口将配管拧进去,可能会导致色谱柱破损。
5.在连接色谱柱出口侧时,在出口侧开放状态下让液体流入色谱柱,当流动相从出口流出且压力不变时,将泵停止后进行安装。安装时与入口侧同样,拿紧出口侧接口处(PEEK制),将PEEK配管插入内侧进行安装。

分析


流动相


1.能够用于分析的流动相为甲醇/水系和乙腈/水系。核酸和核酸医药的测定请使用含有离子对试剂的缓冲液作为流动相。另外,使用不同的离子对试剂会造成数据重现性变差,若要进行关于离子对试剂变化的讨论,请使用不同的色谱柱。
2.请使用pH在中性附近的流动相。pH的变更可能会导致重现性变差或引起色谱柱的提前劣化。
3.请过滤(0.45 μm以下滤膜)流动相去除杂质后再进行充分脱气。
4.为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞,建议使用线上过滤器。
5.由于会造成色谱柱寿命的极度缩短,请不要用100%的水作为流动相。

 

样品溶液的配制


1.请将核酸样品溶解在流动相或水中进行分析。
2.样品溶液的pH请设定在与流动相相同的中性附近。

 

分析时的注意事项


1.请确认使用的HPLC装置能够以50 μL/min的流速稳定送液,并能够使用内径1 mm的色谱柱。
2.如果使用本公司的NANOSPACE,为了将设备死体积降低到极限,从进样器到色谱柱和色谱柱到检测器之间的连接管请使用内径0.13 mm(红色)的PEEK配管。
(产品名:PEEK配管1/16 inch × 0.13 mm i.d. 红,产品编号:F2331)
3.如果使用的是本公司的UV-VIS检测器,请使用3μL的半微量样品池,并将时间常数设定为RAPID。
4.混合器请使用本公司的低容量混合器(50 μL)
(产品名:低容量混合柱,产品编号:F3451)
5.梯度分析结束后,请用含有机溶剂多的流动相进行置换。
色谱柱的保存请参照“色谱柱的保存”

色谱柱的保存

1.不使用色谱柱时请用乙腈进行置换。请注意置换时可能会出现的盐析以及色谱柱压上升等。
2.请用附带的堵头密封,保存在温差小的阴冷处。
3.冲洗色谱柱时,请不要使用100%的水作为流动相。

色谱柱的连接

请按照图2所示进行配管连接。若配管不匹配,特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时,锥箍前端的长度(图2中的V)与尾端接头的长度(图2中的L)经常会不同,因而引发故障。
若L>V,会产生死体积,甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象,并且分离变差。
若L<V,由于锥箍无法密封,所以会导致漏液。
※ 频繁更换色谱柱,可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。这种情况下若进一步拧紧,螺母的头部可能会发生断裂。请使用PEEK制的配管和锥箍。尤其推荐本公司的螺头锥箍一体化的螺丝(PEEK圆形,产品编号:F2223)。使用金属制配管和锥箍时也可能会出现漏液现象。

图2 色谱柱的连接图

Nucleonavi在出厂前已进行了严格的性能检查。但是万一出现不合格产品,请麻烦您联系我公司。但是,若未按照色谱柱寿命相关事项或上述使用注意事项进行使用而导致劣化时,我们不能承担该类责任,望请谅解。
收到商品后10天以内若无投诉,即可认定为合格品。在此之后不能再更换,望请谅解。

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