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CAPCELL PAK MF

聚合物包被型的高耐久性生物样品前处理色谱柱 ~MF…Mixed Function 化学稳定性和批次重复性优越的前处理色谱柱~

CAPCELL PAK MF使用与UG系列相同的经过精密分级的高纯度硅胶作为基材,在表面形成均一的用硅氧聚合物包被薄膜,再导入亲水基团聚氧乙烯基和苯基等疏水基团,并以一定比例进行键合。
含有蛋白质的生物样品注入色谱柱后,蛋白质等大分子受到与填料相结合的亲水基团的空间位阻和因孔径小而产生的尺寸排阻的影响,不被保留而直接溶出。而药物和代谢物这样的小分子化合物则与填料中的疏水性基团进行相互作用(反相分配),从而得到保留并且溶出。CAPCELL PAK MF兼具以上两种分离原理,并具有优越的化学稳定性,无批次间差异,重复性良好,是更理想的前处理色谱柱。

 

和现有商品的构造比较

 

物性值

疏水性基团 硅胶类型 细孔径
(nm)
粒径
(μm)
比表面积
(m2/g)
C% 密度
(μmol/m2)
pH范围 极性基团
C8 (辛基) SG 8 5 450 14 1.4 2~9* 聚氧乙烯基
Ph (苯基) SG 8 5 450 12 1.2 2~9* 聚氧乙烯基
SCX (磺酸基) SG 8 5 450 9 0.9 2~9* 聚氧乙烯基

*虽然填料本身可在该pH范围内使用,但考虑到蛋白质变性的情况,pH适用范围为2.0~7.5

蛋白质直接通过

分离机理(尺寸排阻与反相分配模式)

 

样品中的全药物浓度(蛋白质结合型+蛋白质游离型)的测定

CAPCELL PAK MF在线色谱柱除蛋白法指样品注入色谱柱后迅速被流动相稀释,作为分析对象的游离型药物得到保留,而蛋白质在移动的过程中,药物与蛋白质间结合的平衡状态发生大幅度改变,从而使药物进一步从蛋白质中游离出来。就像这样,几乎全部药物在色谱柱上得到了保留。

*和蛋白质结合很强的药物可能会出现回收率低的情况。

批次间差异更小

经聚合物包被处理后,受硅胶基材的影响很小

非常优越的耐久性


分析色谱柱的耐久性

 


色谱柱:CAPCELL PAK MF Ph-1; 4.6 mm i.d. × 100 mm
流动相:100 mmol/L磷酸盐缓冲液 / CH3CN = 90 / 10, pH 6.98
流 速:1.0 mL/min
温 度:40℃
检 测:UV 254 nm
进样量:20 μL

 

药物的回收率良好

 

 

拥有以上特长的CAPCELL PAK MF色谱柱的三大功能

 

 

几种CAPCELL PAK MF色谱柱的使用区分

MF色谱柱的分离模式

 

反相分配模式:C8 • Ph
以强疏水性物质为分析对象,Ph柱中π电子相互作用也发挥功能。

阳离子交换模式:SCX
利用具有氨基等阳离子的反相分配模式,适用于分析保留困难的强极性物质。

GPC模式:C8 • Ph • SCX
作为亲水基团的聚氧乙烯基体积较大,因此也发挥GPC模式作用。对蛋白质等大分子杂质及亲水性小分子化合物的保留与分离具有分析可能性。

可根据不同官能团对药物的保留时间进行调整

药物的保留行为随疏水性官能团的不同而变化

 


色谱柱:4.6 mm i.d. × 150 mm
流动相:100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.9)/ CH3CN = 80 / 20
流 速:1.0 mL/min
检 测:UV 254 nm

分离模式为强阳离子交换的SCX,可以对反相模式中保留困难的强极性碱性化合物进行选择性的保留

普鲁卡因胺

 

碱性化合物普鲁卡因胺极性较强,在疏水性相互作用下(反相分配)很难得到保留。

 

规格与用途

 

色谱柱的使用指导

CAPCELL PAK系列色谱柱可以作为分析色谱柱单独使用,但利用前处理柱的除蛋白功能和样品浓缩功能,通过柱切换可实现数倍~40倍的高灵敏度分析。

 

 

血中微量药物的分析(单独使用MF色谱柱)

 
人血浆中的催眠镇静药

 

 

小牛血清中的磺胺类药物(抗菌药)

 

血中微量药物的高灵敏度分析(2色谱柱系统)

 

柱切换系统

 

 

吲哚美辛


人血清中的蛋白质在死体积附近溶出后,吲哚美辛得到保留并溶出,在6.6~8.2分种之间进行柱切换,所得分析结果如下图所示。

 

 

在不同分离模式下对人血浆中普鲁卡因胺和N-乙酰普鲁卡因胺的分析

 

MF柱芯(SCX)- SCX使用例(阳离子交换模式)

 

使用阳离子交换模式对目标物质进行选择性保留,得到干扰较少的良好色谱图。

 

 

前处理色谱柱:MF柱芯(SCX)2.0 mm i.d. × 10 mm
流动相 :100 mmol/L磷酸盐缓冲液 / CH3CN = 80 / 20(pH 7.36)
分析色谱柱 :CAPCELL PAK SCX UG80; 2.0 mm i.d. × 150 mm
流动相 :100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.9)/ CH3CN = 60 / 40
流速 :200 μL/min
检测 :UV 270 nm
进样量 :20 μL
样品 :①普鲁卡因胺(100 ng/mL)②N-乙酰普鲁卡因胺(100 ng/mL)

 

MF柱芯(Ph-1)-C18使用例(反相分配模式)

 

 

前处理色谱柱:MF柱芯(Ph-1)2.0 mm i.d. × 10 mm
流动相 :100 mmol/L磷酸盐缓冲液 / CH3CN = 95 / 5
分析色谱柱 :CAPCELL PAK C18 UG120; 1.5 mm i.d. × 250 mm
流动相 :100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.9)/ CH3CN = 85 / 15
流速 :100 μL/min
检测 :UV 270 nm
进样量 :20 μL
样品 :①普鲁卡因胺(100 ng/mL)②N-乙酰普鲁卡因胺(100 ng/mL)

 

血中微量药物的高灵敏度分析(3色谱柱系统)

 

柱切换系统

 

 
人血清中卡马西平和苯妥英钠的分析

 

 

第一次分离(A+B)

色谱柱:CAPCELL PAK MF柱芯(Ph-1): 4.0 mm i.d. × 10 mm

    CAPCELL PAK C18 UG120 S5; 1.5 mm i.d. × 35 mm

流动相:100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7) / CH3CN = 90 / 10

流 速:A : 0.5 mL/min B : 0.25 mL/min

温 度:40℃

检 测:UV 254 nm

进样量:100 μL

第二次分离(C)
色谱柱:CAPCELL PAK C18 UG120 S5; 1.5 mm i.d. × 250 mm
流动相:100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7) / CH3CN = 30 / 70
流 速:0.1 mL/min
温 度:40℃

可作为LC-MS的前处理色谱柱


人尿中的血清素的分析


MF柱(SCX)可以在挥发性盐条件下调整保留程度,因此可以作为LC-MS的前处理色谱柱来应用。

 


色谱仪:NANOSPACE SI-1
前处理色谱柱:MF柱芯(SCX): 2.0 mm i.d. × 10 mm
流动相:20 mmol/L CH3COONH4 / CH3CN = 80 / 20, pH 7.2
分析用色谱柱:CAPCELL PAK C18 UG80; 1.5 mm i.d. × 150 mm
流动相:20 mmol/L CH3COONH4 / CH3CN = 20 / 80, pH 7.8
流速:100 μL/min
检测:UV 220 nm
进 样 量:20 μL
样品:male, age 30, fresh urine 30μL, 0.45μm滤膜过滤

产品一览表

■MF C8

 

产品编号 类型 粒径
(μm)
内径
(mm)
柱长
(mm)
F60601 SG80 5 1.5 35
F60602 SG80 5 1.5 50
F60599 SG80 5 1.5 75
F60603 SG80 5 1.5 100
F60604 SG80 5 1.5 150
F60570 SG80 5 2.0 35
F60571 SG80 5 2.0 50
F60576 SG80 5 2.0 75
F60572 SG80 5 2.0 100
F60573 SG80 5 2.0 150
F60520 SG80 5 4.6 35
F60521 SG80 5 4.6 50
F60519 SG80 5 4.6 75
F60522 SG80 5 4.6 100
F60523 SG80 5 4.6 150
F12426 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 10
F12428 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 20
F12415 卡套-10(L) 10
F12414 卡套-20(L) 20

G : 保护柱

 

■MF Ph-1

 

产品编号 类型 粒径
(μm)
内径
(mm)
柱长
(mm)
F60551 SG80 5 1.5 35
F60552 SG80 5 1.5 50
F60555 SG80 5 1.5 75
F60554 SG80 5 1.5 100
F60553 SG80 5 1.5 150
F60540 SG80 5 2.0 35
F60541 SG80 5 2.0 50
F60545 SG80 5 2.0 75
F60542 SG80 5 2.0 100
F60543 SG80 5 2.0 150
F60500 SG80 5 4.6 35
F60501 SG80 5 4.6 50
F60498 SG80 5 4.6 75
F60502 SG80 5 4.6 100
F60503 SG80 5 4.6 150
F12436 SG80 柱芯 (2PCS) 5 2.0 10
F12437 SG80 柱芯 (5PCS) 5 2.0 10
F12443 SG80 柱芯 (2PCS) 5 2.0 20
F12444 SG80 柱芯 (5PCS) 5 2.0 20
F12416 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 10
F12417 SG80 柱芯 (5PCS) 5 4.0 10
F12440 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 20
F12441 SG80 柱芯 (5PCS) 5 4.0 20
F12415 卡套-10(L) 10
F12414 卡套-20(L) 20
G : 保护柱

 

■MF SCX

 

产品编号 类型 粒径
(μm)
内径
(mm)
柱长
(mm)
F60611 SG80 5 1.5 35
F60612 SG80 5 1.5 50
F60615 SG80 5 1.5 75
F60613 SG80 5 1.5 100
F60614 SG80 5 1.5 150
F60580 SG80 5 2.0 35
F60581 SG80 5 2.0 50
F60584 SG80 5 2.0 75
F60582 SG80 5 2.0 100
F60583 SG80 5 2.0 150
F60530 SG80 5 4.6 35
F60531 SG80 5 4.6 50
F60529 SG80 5 4.6 75
F60532 SG80 5 4.6 100
F60533 SG80 5 4.6 150
F12475 SG80 柱芯 (2PCS) 5 2.0 10
F12471 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 10
F12458 SG80 柱芯 (2PCS) 5 4.0 20
F12415 卡套-10(L) 10
F12414 卡套-20(L) 20
G : 保护柱

 

CAPCELL PAK MF生物样品直接注入用色谱柱说明书

 

感谢您购买生物样品直接注入用CAPCELL PAK MF色谱柱。
CAPCELL PAK MF色谱柱的填充剂是以精密分级的高品质球状硅胶为基材,采用包被型疏水性与亲水性按一定比例结合而成的混合功能(Mix Function)填充剂。
为了充分活用本品和长期安定地使用,请熟读本说明书,并正确使用。

色谱柱的使用

1. 轻拿轻放,避免可能导致柱子毁坏的震荡和碰撞。
2. 只有当压力表指示零度时进行装配或者卸装色谱柱。

色谱柱的安装

1.色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。请确保装置的配管接头正确连接,并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。
2. 安装色谱柱之前,请将装置配管内的液体置换成所用的流动相。
※请确认色谱柱出厂时的溶剂(记录在色谱柱附带的报告中),并注意盐析现象等。
3. 请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱。

 

分析


流动相


①有机溶液的浓度(V/V)不得超过20%。由于甲醇是较强的蛋白质变性剂,请避免使用。推荐使用乙腈、THF、IPA。
<基本条件>请在最初时使用 磷酸缓冲液 / 乙腈 = 80 / 20
②使用pH值范围为2~7.5。流动相的pH值不应超越此范围,以免色谱柱的过早劣化。本品严禁使用碱性流动相。
③请务必确保完全去除流动相中的气泡,并通过薄膜(0.45 μm或更细微的膜)过滤的方法去除其中的杂质。色谱柱的入口筛板厚度为2 μm, 为有效地阻隔了可能存在杂质组分对柱子的阻塞,推荐使用在线过滤器。
④ 新品MF色谱柱的出厂保存液为0.2 mol/L NH4H2PO4。在含有无机盐的流动相置换时,请注意置换顺序,不要使盐析出。
⑤ 以下操作通常会影响色谱柱的使用寿命
.频繁改变移动相成分或者采用具有较低兼容性的移动相。
.突然改变柱压力。
.使用粘度高的移动相,产生较高的柱压。

 

样品处理

 

当本品用于血清等生体样品分析时,与ODS系的柱子相比,前处理将能大大简化。

 

CAPCELL PAK MF 常规ODS系色谱柱
1.血清 1.血清
2.以0.2μm滤膜过滤上述样品溶液 2.蛋白质沉淀
3.离心分离
4.取上清液
5.蒸发除去提取液
6.用溶剂对残留成分进行复溶
7.以0.2μm进样滤膜对上述样品溶液进行过滤
3.进样 8.进样

① 生物样品(血清、血浆、尿等)请务必先通过0.2 μm滤膜进行过滤。
② 尽量采用含有与流动相中组分相同溶液对样品进行溶解。

耐久性

虽然根据分析条件和样品溶液的不同会有变化,但最大累计进样量大概为10mL。

色谱柱的保存

请用附带的堵头密封,保存在温差小的阴冷处。

色谱柱的连接

① 4.6 mm内径CAPCELL PAK 色谱柱的柱头中有一内置过滤筛板,见图1。过滤筛板不能单独更换。当过滤筛板被堵塞或柱压升高时,需更换整个柱头。
② 请按照图1所示进行配管连接。若配管不匹配,特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时,锥箍前端的长度(图1中的V)与尾端接头的长度(图1中的L)经常会不同,因而引发故障。

若L>V,会产生死体积,甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象,并且分离变差。
若L<V,由于锥箍无法密封,所以会导致漏液。
※ 频繁更换色谱柱,可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。这种情况下若进一步拧紧,螺母的头部可能会发生断裂。
 

故障与对策

使用高效液相色谱法进行测定时所出现的问题,存在各种原因。但由于无法将其一一列举,故在此只说明色谱柱及其周边较容易出现的问题。

 

问题现象 原因 对策
色谱柱压升高 异物堵塞
①流动相、样品溶液中杂质、不溶物
②配管内的水垢
③活塞密封圈的碎片
④样品成分的析出
・预先用滤膜对流动相、样品溶液进行过滤。
・安装线上过滤器。
・清理配管及更换活塞密封圈。
・使用流动相配制样品溶液。
色谱峰分裂、拖尾、展宽 ①由于配管连接错误导致产生死体积
②流动相条件不适合
・离子抑制法:抑制不充分(样品量过多)
・离子对法:离子对试剂浓度不足(样品量过多)
③色谱柱劣化
※若色谱柱劣化或填充层出现裂隙,则无法进行修复。
・重新连接配管。
・考察pH、盐浓度、样品量等。
・考察离子对试剂浓度、pH、样品量等。
・通过柱效检测来确认色谱柱性能
保留时间延迟或不稳定 ①漏液(根据泵压值进行判断)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
・检查泵、配管系列的漏液情况。
・充分平衡。
保留时间变短 ①使用强酸或碱导致配位基断裂(劣化)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
・充分平衡。

 

CAPCELL PAK MF色谱柱在出厂前已进行了严格的性能检查,但是万一出现不合格产品,请麻烦您联系我公司。
但是,若未按照色谱柱寿命相关事项或上述使用注意事项进行使用而导致劣化时,我们不能承担该类责任,望请谅解。
收到商品后10天以内若无投诉,即可认定为合格品。在此之后不能再更换,望请谅解。

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