GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定
摘要
核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。食品中核苷酸的检测，推荐使用色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ , CAPCELL PAK ADME。CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱可在100%水相下稳定使用，适用于极性较大物质的高水相条件下的分析；CAPCELL PAK ADME键合了笼状金刚烷基团，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。
前言
核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、鸟嘌呤核苷酸（GMP）及次黄嘌呤核苷酸（IMP）等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。
食品中核苷酸的检测，推荐使用色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ , CAPCELL PAK ADME。
CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱可耐受纯水条件，因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果。
CAPCELL PAK ADME键合金刚烷基, 兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。
实验方法
第一部分 CAPCELL PAK C18 AQ 检测方法
《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调
一、核苷酸标准曲线的制作
配制系列标准工作液进行标准曲线的制作，各核苷酸的具体浓度如表1所示。
胞嘧啶核苷酸(CMP)在2.859 µg/mL-45.746 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R^2=1.00；腺嘌呤核苷酸(AMP)在1.108 µg/mL-17.735 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999；尿嘧啶核苷酸(UMP)在1.109 µg/mL-17.738 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999；鸟嘌呤核苷酸(GMP)在1.160 µg/mL-18.567 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999；次黄嘌呤核苷酸(IMP)在1.075 µg/mL-17.201 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999.
表1 标准溶液中各核苷酸的浓度
二、实际样品分析
按照国标方法，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果；对30个样品进行前处理后进行分析，样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好，且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。
表2 样品定量浓度结果
图7 核苷酸样品分析结果
图8 6针样品分析叠加色谱图
基于个别样品分析时遇到的CMP与其前杂质未得到良好分离的情况，通过对洗脱条件进行调整，可实现CMP与其前杂之间的良好分离。
第二部分ADME色谱柱的分析
CAPCELL PAK ADME键合金刚烷基,表面极性很高；在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。
值得注意的是，ADME色谱柱的溶出顺序与常规反相C18色谱柱不尽相同，再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于C18色谱柱的老师来说，具有独特溶出模式的CAPCELL PAK ADME色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。
图10 ADME对5种核苷酸标准品的分析结果
图 11 ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果
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