《GB 5009.157-2016 食品安全国家标准食品有机酸的测定》
《GB 5009.157-2016 食品安全国家标准食品有机酸的测定》中规定了对食品中酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、丁二酸、富马酸和己二酸七种有机酸的测定方法，方法中推荐使用大曹三耀的中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MG S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm进行分析。
但由于该方法流动相中水相比例较高（有机相比例仅为2.5%），考虑到保留时间和色谱柱使用寿命等因素，实验室也尝试使用能耐受纯水的CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱进行分析，并考察了线性及灵敏度，并对实际样品进行了分析，均可得到良好结果。
依据国标方法，将七种有机酸分为两组分别测定。首先对第一组（酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、丁二酸和富马酸）和第二组（己二酸）标准品进行分析，如图1，第一组六种有机酸可得到良好保留与分离，各组分离度均在3.0以上，保留程度比MG色谱柱有所增强，酒石酸保留时间延长至3.7 min；如图2，第二组中己二酸亦可得到良好分析结果。
图1 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析标准工作液所得结果
*注：峰上标数字为分离度。
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（柱号：A6AD 04296）
流动相：A : 0.1%磷酸/ 甲醇= 97.5 / 2.5 B: 甲醇
B% 0%（0min）-> 0%（10min）-> 100%（10.1min）-> 100%（15min）->0%（15.1min）
流 速：1.0 mL / min
温 度：40 °C
检 测：PDA 210 nm
进样量：20 μL
样 品：酒石酸100 μg/mL，苹果酸、乳酸和柠檬酸各200 μg/mL，丁二酸500 μg/mL，富马酸0.5 μg/mL，用水溶解稀释。
图2 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析己二酸标准工作液所得结果
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（柱号：A6AD 04296）
流动相：0.1%磷酸/ 甲醇= 75 / 25
流 速：1.0 mL / min
温 度：40 °C
检 测：PDA 210 nm
进样量：20 μL
样 品：己二酸200 μg/mL，用水溶解稀释。
（1）标准曲线绘制
依据国标方法对标准曲线进行绘制。如图3~9所示，酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、丁二酸、富马酸和己二酸在标曲浓度范围内均得到良好线性，相关系数R2均在0.999以上（见表1），符合国标中检量线和定量限要求。
图3 酒石酸 浓度-峰面积标准曲线
图4 苹果酸 浓度-峰面积标准曲线
图5 乳酸 浓度-峰面积标准曲线
图6 柠檬酸 浓度-峰面积标准曲线
图7 丁二酸 浓度-峰面积标准曲线
图8 富马酸 浓度-峰面积标准曲线
图9 己二酸 浓度-峰面积标准曲线
（2）实际样品分析
进一步，我们尝试对某厂家果汁饮料样品A进行分析，结果发现能够对成分表中显示添加的柠檬酸进行良好检测，测得柠檬酸含量为2.18 g/kg；同时，在苹果酸附近发现干扰峰（见图10）。通过观察苹果酸及干扰峰I的紫外吸收光谱，发现干扰峰I并非苹果酸（见图11-1,11-2）。
图10 果汁样品A分析结果（G1）
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（柱号：A6AD 04296）
流动相：A : 0.1%磷酸/ 甲醇= 97.5 / 2.5 B: 甲醇
B% 0%（0min）-> 0%（10min）-> 100%（10.1min）-> 100%（15min）->0%（15.1min）
流 速：1.0 mL / min
温 度：40 °C
检 测：PDA 210 nm
进样量：20 μL
样 品：称取5 g样品于25 mL量瓶中，加水至刻度摇匀，经0.45 μm水相滤膜过滤。
为摒除干扰峰影响，尝试将柱温由40°C降至25°C，并对梯度条件进行优化调整，结果可以看到干扰峰I同苹果酸和乳酸得到了有效分离（见图12）。
图12 果汁样品A分析结果（G2）
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（柱号：A6AD 04296）
流动相：A : 0.1%磷酸 B: 甲醇
B% 0%（0min）-> 20%（10min）-> 80%（10.1min）-> 80%（15min）->0%（15.1min）
流 速：1.0 mL / min
温 度：40 °C
检 测：PDA 210 nm
进样量：20 μL
样 品：称取5 g样品于25 mL量瓶中，加水至刻度摇匀，经0.45 μm水相滤膜过滤。
同时，对果汁样品A中的己二酸进行测定，样品中未检出己二酸（见图13）
图13 果汁样品A分析结果
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm（柱号：A6AD 04296）
流动相：0.1%磷酸/ 甲醇= 75 / 25
流 速：1.0 mL / min
温 度：40 °C
检 测：PDA 210 nm
进样量：20 μL
样 品：称取5 g样品于25 mL量瓶中，加水至刻度摇匀，经0.45 μm水相滤膜过滤。
综上实验结果，使用可在纯水相条件下稳定使用的高极性CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱，能够实现国标GB 5009.157-2016方法中七种有机酸的良好分析，在标曲浓度范围内可得到良好线性结果，相关系数均在0.999以上；同时对果汁样品A进行分析时，通过调整条件，可实现实际样品中有机酸的良好检出。
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