食品中纳他霉素的分析 参考食品安全国家标准（GB5009.286-2022）
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纳他霉素（Natamycin）是一种由链霉菌发酵产生的天然抗真菌化合物，属于多烯大环内酯类，既可以广泛有效地抑制各种霉菌、酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生，是一种食品防腐剂。
纳他霉素基本无毒，进入人体内后很难被消化道吸收，可直接排出体外，人体摄入量通常远远低于安全限量，如果食用过量，纳他霉素可中和抗体，损害健康。《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中规定：发酵酒、糕点类食品中纳他霉素的最大使用限量分别为0.01 g/ kg、0.3 g/ kg。
按照食品安全国家标准（GB5009.286-2022）食品中纳他霉素的测定方法，分别使用CAPCELL PAK C18 KG和DAISOPAK SP-100-5-ODS-P对纳他霉素标准品及啤酒、糕点样品进行分析，但纳他霉素保留较短，与啤酒样品基质发生干扰（如图1），无法得到良好分离结果。
图1 CP KG和ODS-P色谱柱分析图
（原国标方法）
【色谱条件】
色谱柱：5 μm，4.6 mm i.d. × 250 mm
流动相：A：5% 乙酸-水 B：甲醇
B% 60%(0 min) - 60%(13 min) - 90%(14 min) - 90%(19 min) - 60%(20 min) - 60%(25 min)
流 速：1.0 mL/min
柱 温：30 ℃
检 测：PDA 305 nm
标准品：1 μg/mL
啤酒样品：直接过0.22 μm滤膜即得
进样量：10 μL
为改善样品基质干扰，尝试降低初始有机相比例至55%后，使用上述色谱柱，对纳他霉素及食品样品进行分析，分析结果中CP C18 KG色谱柱未见明显样品基质干扰（如图2），啤酒样品及糕点样品中均不含纳他霉素。
图2 CP C18 KG色谱柱分析图
优化梯度条件
【色谱条件】
色谱柱：CAPCELL PAK C18 KG S5; 4.6×250
流动相：A，5% 乙酸-水 B，甲醇
B% 55%(0 min) - 55%(13 min) - 90%(14 min) - 90%(19 min) - 55%(20 min) - 55%(25 min)
流 速：1.0 mL/min
柱 温：30 ℃
检 测：PDA 305 nm
标准品：1 μg/mL
啤酒样品：直接过0.22 μm滤膜即得
糕点样品：称取0.5 g糕点样品，置于5 mL离心管中，加入1.5 mL甲醇超声提取20 min，加入1 mL水混匀，以4000 r/min离心10 min，上清液过0.22 μm滤膜，即得。
进样量：10 μL
在上述优化后的梯度条件下进行精密度及线性实验的考察。精密度实验：纳他霉素1.0 mg/mL标准品溶液连续进样六针，结果如表1所示，纳他霉素峰面积RSD为0.34%，精密度良好；线性考察结果如图3所示，纳他霉素在0.5 µg/mL-10 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数r=0.9999。
表1 精密度考察
图3 线性考察
在上述优化后的梯度条件下，使用CP C18 KG色谱柱对加标啤酒样品及糕点样品进行分析，结果如图4、5和表2、3所示，两种食品样品中纳他霉素与其相邻未知杂质分离度均大于1.5，啤酒样品加标回收率97%。
图4 CP C18 KG啤酒样品加标
优化梯度条件
表2 积分表
图5 CP C18 KG糕点样品加标
优化梯度条件
表3 积分表
综上所述，使用CAPCELL PAK C18 KG S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，在食品安全国家标准（GB5009.286-2022）食品中纳他霉素的测定方法基础上微调梯度后，纳他霉素标准品及啤酒、糕点样品的良好检测结果，满足标准要求。