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CAPCELL PAK C18 MG

在CAPCELL PAK系列中,对极性物质有非常强的保留能力与高柱效~MG…Miracle Grade 奇迹的高柱效、高耐久性色谱柱~

CAPCELL PAK C18 MG使用了专为MG开发的高纯度硅胶作为基材,硅胶细孔径为10 nm,同时,对分离不利的微细孔很少,因此有效比表面积更大。对硅胶表面进行了大阪曹達独有的聚合物包被处理后,通过设定十八烷基的导入量使填料表面极性和疏水性达到最好平衡。因此,在对未知物或是复杂的多组分样品进行分析时,其高保留能力和高柱效将发挥很大威力。同时,耐酸性和耐碱性均为世界超高水平,通过高度严格的品质管理保证万全的稳定供货,是非常适合于专业液相色谱分析的聚合物包被型硅胶系C18色谱柱。

物性值/参数图

官能团 细孔径
(nm)
粒径
(μm)
比表面积
(m2/g)
C% 密度
(μmol/m2)
pH范围 USP
C18 (十八烷基) 10 3 300 15 2.3 2~10 L1
C18 (十八烷基) 10 5 260 15 2.7 2~10 L1

 

从极性化合物到疏水性化合物,对应各种极性的高保留能力和高柱效

碱性化合物的保留

 

 

酸性化合物的保留

 

 

中性(极性)化合物的保留

 

 

脂溶性化合物的保留

 

 

有机酸的保留比较

 

 

极大限度地抑制残留硅醇基的二次效应


常规硅胶系色谱柱由于受到硅胶基材表面残留硅醇基和金属杂质的影响,在分析碱性化合物时普遍易出现色谱峰拖尾的现象。而MG色谱柱凭借填料表面致密的聚合物包被来抑制硅胶基材的影响,因此能得到对称性良好的色谱峰。

 

吡啶/苯酚的色谱图比较数据

 

极大限度地减少配位化合物的吸附

以高度精制的高纯度硅胶作为基材,通过独特的金属排除填充技术,能使桧木醇这类的强配位性化合物也能以尖锐峰形溶出。

 

桧木醇的峰形比较

 

 

究极对称的峰形


吡啶的峰对称性

 


色谱峰形易受到填料的物理形状、粒度分布,以及官能团和杂质等表面结构的化学性状方面的影响;而MG色谱柱凭借其精密控制的聚合物包被技术,能对吡啶这类容易在中性条件下发生吸附的碱性化合物得到良好峰形。

 

实现了硅胶系色谱柱极高水准的耐碱性


碱性流动相(pH 10)通液时萘的保留变化率(容量因子k)

 

 

耐碱性试验的比较


对可耐受pH 12的他社杂化型硅胶色谱柱按照其评价方法进行了耐碱性试验。
将苊的理论塔板数降低到新柱所得结果的50%,或柱压上升至不能使用的时间长度作为色谱柱的寿命,在以下条件下进行耐久性试验。
按照“分析→碱接触1小时→冲洗→碱接触1小时→冲洗→分析”的顺序,将色谱柱通碱液1小时后进行冲洗,每通碱液2小时进行一次分析。

 

 

耐碱性试验过程中保留时间的变化


他社的杂化型硅胶色谱柱经过20小时后,保留时间急剧缩短,而MG色谱柱的保留时间几乎无变化。而且MG在过50小时后才出现理论塔板数略微降低的现象,且降低很少,可以认为具有与初始结果同等的耐久性。这说明MG色谱柱因其为聚合物包被型填料色谱柱,官能团及硅胶基质表面的稳定性非常高;相反,杂化型ODS色谱柱的硅胶基材稳定性虽高,但其官能团也很容易脱落。

 

 

耐碱性试验时过程中相对理论塔板数的变化

 

 

接近10万/m的理论塔板数

能同时兼顾约10万/m的高理论塔板数和低压力。

 

 

优异的批次间再现性


在填料生产管理中,对“硅胶基材规格”和“填料各性质规格”两方面进行了严格控制,因此几乎没有批次间差异。
工厂通常预留3个批次以应对色谱柱批次认证。


●硅胶基材规格→

 比表面积、细孔容积、平均细孔径、平均粒径、金属含量


 使用高纯度硅胶…

 每种金属杂质的含量均在5 ppm以下。


 低柱压…

 通过高度精密分级除去微粉和粗粉。


●填料各性质规格→

 疏水性相互作用、极性、氢键结合性、离子交换性、配位结合性、平面识别能力

 

 

GLP/GMP对应色谱柱

CAPCELL PAK C18 MG(粒径3μm、5μm)作为GLP/GMP对应色谱柱,附有填料证明书。
GLP(Good Laboratory Practice):
在医药品的开发过程中,特别作为对安全性试验数据的可靠性需求较高时的指标。
GMP(Good Manufacturing Practice):
在医药品的生产过程中,作为确保医药品品质、对其生产制造及品质管理的基准。

快速分析/高理论塔板数色谱柱 CAPCELL PAK C18 MG S3

使用常规流速(例:内径4.6 mm的色谱柱对应1.0 mL/min)2倍左右的流速时,可以得到最高理论塔板数,即使进一步提高流速,理论塔板数也不会降低。
因此,为缩短分析时间,请尽可能在压力允许范围内的最高流速条件下使用(推荐常用压力:15 MPa,最大使用压力:20 MPa)。
使用3 μm粒径色谱柱时,选择同等条件下5 μm色谱柱2/3的柱长,即可得到相同程度的理论塔板数,同时分析时间亦可缩短至原来的2/3;进一步将流速提升至2倍,可将分析时间再缩短一半。
综上所述,使用MG S3色谱柱进行分析能得到更好的分离效果,并且可以实现常规流速3倍左右条件下的快速分析。

 

 

三环类抗抑郁药的分析例

 

 

产品一览表

■C18

 

产品编号 类型 粒径
(μm)
内径
(mm)
柱长
(mm)
F90923* MG 3 0.3 150
F90933* MG 3 0.5 150
F90841* MG 3 1.0 35
F90942* MG 3 1.0 50
F90946* MG 3 1.0 75
F90947* MG 3 1.0 100
F90948* MG 3 1.0 150
F90831* MG 3 1.5 35
F90832* MG 3 1.5 50
F90836* MG 3 1.5 75
F90837* MG 3 1.5 100
F90838* MG 3 1.5 150
F90820* MG 3 2.0 20
F90821* MG 3 2.0 35
F90822* MG 3 2.0 50
F90826* MG 3 2.0 75
F90827* MG 3 2.0 100
F90828* MG 3 2.0 150
F90811* MG 3 3.0 35
F90812* MG 3 3.0 50
F90816* MG 3 3.0 75
F90817* MG 3 3.0 100
F90818* MG 3 3.0 150
F90801* MG 3 4.6 35
F90802* MG 3 4.6 50
F90806* MG 3 4.6 75
F90807* MG 3 4.6 100
F90808* MG 3 4.6 150
F12301* MG 柱芯 (2PCS) 3 2.0 10
F12303* MG 柱芯 (2PCS) 3 2.0 20
F12305* MG 柱芯 (2PCS) 3 4.0 10
F12307* MG 柱芯 (2PCS) 3 4.0 20
F12415 卡套-10(L) 10
F12414 卡套-20(L) 20
F90903 MG 5 0.3 150
F90913 MG 5 0.5 150
F90501* MG 5 1.0 35
F90502* MG 5 1.0 50
F90500* MG 5 1.0 75
F90505* MG 5 1.0 100
F90503* MG 5 1.0 150
F90504* MG 5 1.0 250
F90401* MG 5 1.5 35
F90402* MG 5 1.5 50
F90400* MG 5 1.5 75
F90405* MG 5 1.5 100
F90403* MG 5 1.5 150
F90404* MG 5 1.5 250
F90306* MG 5 2.0 20
F90301* MG 5 2.0 35
F90307* MG 5 2.0 50
F90302* MG 5 2.0 75
F90305* MG 5 2.0 100
F90303* MG 5 2.0 150
F90304* MG 5 2.0 250
F90201* MG 5 3.0 35
F90205* MG 5 3.0 50
F90206* MG 5 3.0 75
F90202* MG 5 3.0 100
F90203* MG 5 3.0 150
F90204* MG 5 3.0 250
F90101* MG 5 4.6 35
F90102* MG 5 4.6 100
F90103* MG 5 4.6 150
F90104* MG 5 4.6 250
F90105* MG 5 4.6 50
F90106* MG 5 4.6 75
F90108* MG 5 4 150
F90109* MG 5 4 250
F90605* MG 5 6.0 35
F90608* MG 5 6.0 150
F90609* MG 5 6.0 250
F90601 MG 5 10 20 G
F90602 MG 5 10 50
F90603 MG 5 10 150
F90604 MG 5 10 250
F90698 MG 5 15 30 G
F90697 MG 5 15 50
F90700 MG 5 15 250
F90701 MG 5 20 35 G
F90702 MG 5 20 50
F90696 MG 5 20 75
F90699 MG 5 20 100
F90703 MG 5 20 150
F90704 MG 5 20 250
F90706 MG 5 30 30 G
F90707 MG 5 30 50
F90708 MG 5 30 75
F90705 MG 5 30 100
F90710 MG 5 30 150
F90709 MG 5 30 250
F90720 MG 5 50 50 G
F90722 MG 5 50 250
F12497 MG 柱芯 (2PCS) 5 2.0 10
F12218 MG 柱芯 (2PCS) 5 2.0 20
F12496 MG 柱芯 (2PCS) 5 4.0 10
F12493 MG 柱芯 (2PCS) 5 4.0 20
F12415 卡套-10(L) 10
F12414 卡套-20(L) 20

 * : 认证对应

G : 保护柱

CAPCELL PAK系列色谱柱使用说明书

 

CAPCELL PAK系列色谱柱是采用在多孔球形硅胶填料表面包覆单层有机硅聚合物薄膜,并在其上键合十八烷基(C18)等各种官能团的高性能填料填充的色谱柱。该填料既具有硅胶类填料的高分离能力和耐压性,又具有聚合物填料的耐久性,是结合了这些优点的具有划时代意义的填料。
为了能够长期且稳定地使用色谱柱,请在熟读该使用说明书后进行正确使用。

 

色谱柱的使用

1) 强烈撞击可能会造成色谱柱劣化,请小心谨慎使用。
2) 请在压力指示为0时进行色谱柱的安装和拆卸。
3) IF2、ADME S2色谱柱的最大使用压为100 MPa,Inert ADME、MGⅢ-H、BB-H色谱柱为50 MPa,IF色谱柱为40 MPa,其它色谱柱最大使用压为20 MPa。

※ADME S2 内径为3.0 mm规格的色谱柱,由于柱身结构的原因,耐压值为60 MPa。

 

色谱柱的安装

1) 色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。请确保装置的配管接头正确连接,并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。

2) 安装色谱柱之前,请将装置配管内的液体置换成所用的流动相。

 ※请确认色谱柱出厂时的溶剂(记录在色谱柱附带的报告中),并注意盐析现象等。

3) 请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱。

 

分析

 

流动相


1) 可用流动相的种类与一般化学键合型硅胶类色谱柱所使用的流动相相同。
2) CAPCELL PAK 的可用pH范围根据键合基团的不同而有所变化。参考值如表1所示。
可用pH范围是以保留时间和理论塔板数不会提早减少为评价基准的。
为防止色谱柱的早期劣化,请注意流动相的pH不要超过表1的范围。如果pH发生大幅度的变化,会引起重现性变差、色谱柱提前劣化等问题。
在有机溶剂含量少、色谱柱温度高的条件下,耐酸耐碱性能会降低。

 

表1 各种色谱柱的可用pH范围(CAPCELL PAK系列)

 

官能基团 C18 C8, Ph, C1, CN NH2 C18 + SCX 其他
类型 ACR MG
UG
AG

IF
IF2
AQ
SG

BB DD UG
AG
SG UG
SG
CR PFP ADME
pH值范围 1-10 2-10 2-9 1-11 1.5-10 2-10 2-9 2-8 2-7 1-10 2-9

 

※根据测定温度以及流动相中的有机溶剂含量而有所变化。

※C1和CN填料由于官能基较短,与C8和Phenyl相比,耐久性有所下降。

3) 请过滤(0.45 μm以下滤膜)流动相去除杂质后再进行充分脱气。

4) 为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞,建议使用线上过滤器。

5) 新色谱柱使用色谱柱报告中标示的流动相封存。若要置换成含无机盐的流动相,请注意置换程序,不要造成盐析出。

6) 使用含有离子对试剂等表面活性剂的流动相,色谱柱的寿命会变短。

7) C18 AQ在使用100%水相作为流动相时,根据条件不同,也有可能会出现寿命极度缩短的情况。如果一定要使用100%水相作为流动相,请在酸性条件下使用磷酸盐缓冲液,这样能够延长色谱柱的寿命。
8) 以下使用方法一般会导致色谱柱劣化,请避免此类操作。
大幅变动pH或频繁变更流动相的组成。
在超过15 MPa(IF为40 MPa)的柱压下连续使用,或者压力急剧变化超过数MPa。

 

样品溶液的配制


1) 请尽量以流动相对样品进行溶解。
2) 样品溶液若采用洗脱能力强的溶剂,会造成色谱峰的展宽。
3) 如样品不易溶于流动相中,进样后会在色谱柱中析出,造成柱压的急剧上升,故需注意。
4) 样品溶液的pH请不要超过色谱柱的可用pH范围。

 

分析时的注意事项

 

1) 在使用C18、C8、 Phenyl、C1和CN柱时:

 a. 请使用与分析柱相同填料的预柱。使用不同填料或其他公司硅胶系化学键合型填料的预柱时,可能无法得到正常的色谱峰。

 b. 中性条件下分析质子化的碱性化合物时,提高流动相中缓冲盐浓度、有机溶剂含量和温度都能使峰形变好。

 c. 使用强酸性或强碱性的流动相后,碱性化合物的峰形会变差。

 

2) 在使用NH2柱时:

●糖类的分析

 a. 请设定乙腈/水的流动相条件。乙腈的浓度越高,则对糖的保留能力越强。

 b. 若采用含甲醇或缓冲盐的流动相,峰会展宽。

 c. 将其他公司硅胶类NH2色谱柱流动相条件中的乙腈含量增加5 vol%,使用我公司NH2柱可重现几乎相同的色谱图。

 d. 若将糖的水溶液作为样品注入,谱峰会展宽。请使用含乙腈50%以上的溶剂来配制糖类样品。

 e. 曾在酸性条件下使用过的色谱柱,糖类分析的保留时间、峰形均会发生变化。

●离子性物质的分析

 a. 请设定乙腈/磷酸缓冲液且具有一定pH值的流动相条件。

 b. 考察流动相条件时,按照pH由高到低的顺序进行考察。

  如果曾经在低pH下使用,填料的表面将无法回到初始状态。

 c. 有时需要长时间平衡色谱柱(24小时以上)。平衡所需时间与通液量和盐浓度紧密相关,因此,时间紧急时请提高流速,或pH不变而增加流动相的盐浓度来进行平衡。

 d. 抗坏血酸的色谱峰有时会出现拖尾现象。

●尿囊素的分析

 尿囊素在pH 2~8范围内未离子化,请使用磷酸缓冲液作为流动相进行分析。

 流动相例:25 mmol/L KH2PO4 / CH3CN = 20 / 80, pH = 1.5(H3PO4

 

3) 在使用CR柱时:

CR柱的填料是由C18填料和SCX填料混合而成的。因此,可通过反相分配和离子交换两种模式来进行分离。离子交换模式中,一般随以下几点洗脱行为发生变化:

 pH(为了使样品充分离子化,流动相pH最好与样品的pKa相差±2.0以上。)

 盐浓度

 有机溶剂量

 盐种类

 

色谱柱的保存

1) 请用附带的堵头密封,保存在温差小的阴冷处。

2) 在使用了TFA等强有机酸或碱(pH>8)的流动相之后,请使用与所选用的流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液进行置换(避免只用水来进行置换)。若是一周以上的长期保存,请进一步使用乙腈进行置换。

3) 若是一个月以上的长期保存,使用不会盐析的溶剂冲洗后,用出厂时的溶剂置换并用附带的堵头密封,保存在冷暗处。

4) 请尽量避免使用100%水相清洗色谱柱。

 

色谱柱的连接

请按照图1所示进行配管连接。若配管不匹配,特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时,锥箍前端的长度(图1中的V)与尾端接头的长度(图1中的L)经常会不同,因而引发故障。

若L>V,会产生死体积,甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象,并且分离变差。

若L<V,由于锥箍无法密封,所以会导致漏液。
※ 频繁更换色谱柱,可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。这种情况下若进一步拧紧,螺母的头部可能会发生断裂。

图1 色谱柱的连接图

 

故障与对策

使用高效液相色谱法进行测定时所出现的问题,存在各种原因。但由于无法将其一一列举,故在此只说明色谱柱及其周边较容易出现的问题。

 

问题现象 原因 对策
色谱柱压升高 异物堵塞
①流动相、样品溶液中杂质、不溶物
②配管内的水垢
③活塞密封圈的碎片
④样品成分的析出
预先用滤膜对流动相、样品溶液进行过滤。
安装线上过滤器。
清理配管及更换活塞密封圈。
使用流动相配制样品溶液。
色谱峰分裂、拖尾、展宽 ①由于配管连接错误导致产生死体积
②流动相条件不适合
离子抑制法:抑制不充分(样品量过多)
离子对法:离子对试剂浓度不足(样品量过多)
③色谱柱劣化
※若色谱柱劣化或填充层出现裂隙,则无法进行修复。
重新连接配管。
考察pH、盐浓度、样品量等。
考察离子对试剂浓度、pH、样品量等。
通过柱效检测来确认色谱柱性能
保留时间延迟或不稳定 ①漏液(根据泵压值进行判断)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
检查泵、配管系列的漏液情况。
充分平衡。
保留时间变短 ①使用强酸或碱导致配位基断裂(劣化)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
充分平衡。

 

CAPCELL PAK系列色谱柱在出厂前已进行了严格的性能检查,但是万一出现不合格产品,请麻烦您联系我公司。
但是,若未按照色谱柱寿命相关事项或上述使用注意事项进行使用而导致劣化时,我们不能承担该类责任,望请谅解。
收到商品后10天以内若无投诉,即可认定为合格品。在此之后不能再更换,望请谅解。

 

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