三耀精细化工品销售（北京）有限公司

官能团	混合比例	粒径 (μm)	pH范围	USP
SCX(磺酸基) C18(十八烷基)	1 : 4 1 : 20 1 : 50	5	2~7	—
SCX(磺酸基) C18(十八烷基)	1 : 4 1 : 20 1 : 50	3	2~7	—

 

使用LC-MS追求灵敏度更高的分析

在LC-MS系统中对碱性化合物进行分析时，酸性条件下的高有机相构成是合适的离子化条件。而C₁₈色谱柱对碱性化合物的保留较弱，因此很难提高流动相的有机相比例。
而CAPCELL PAK CR具有SCX的作用机理，因而在酸性高有机相构成的流动相条件下可以对碱性化合物得到适度的保留，进而能够实现LC-MS下对碱性化合物的高灵敏度分析。

 

 

色谱柱：CAPCELL PAK CR 1:20 S3; 2.0 mm i.d. × 150 mm

　　　　CAPCELL PAK CR 1:20 S5; 2.0 mm i.d. × 150 mm

　　　　高极性ODS色谱柱 S3.5; 2.1 mm i.d. × 150 mm

流动相：10 mmol/L HCOONH₄ (pH 3, HCOOH) / CH₃CN
流　速：200 μL/min
温　度：40℃
检　测：MS, ESI, Positive mode
进样量：2 μL
样　品：普鲁卡因（溶解于相应比例流动相中）

 

对酸性•中性•碱性化合物进行共同分析

 

CAPCELL PAK CR不仅能对碱性化合物进行分析，对中性、酸性化合物也能进行共同分析。通过调整流动相的盐浓度，在离子交换作用下针对碱性化合物的保留程度进行调整，从而改变分离模式。

 

 

色谱柱：CAPCELL PAK CR S5; 2.0 mm i.d. × 150 mm
流动相：(a) 20 mmol/L CH₃COONH₄(pH 4.0, CH₃COOH) / CH₃CN = 30 / 70

　　　　 (b) 10 mmol/L CH₃COONH₄(pH 4.0, CH₃COOH) / CH₃CN = 30 / 70

　　　　 (c) 5 mmol/L CH₃COONH₄(pH 4.0, CH₃COOH) / CH₃CN = 30 / 70

流　速：200 μL/min
温　度：40℃
检　测：UV 220 nm
进样量：1 μL
样　品：①Flurbiprofen（酸性物质）②Toluene（中性物质）③Verapamil（碱性化合物）④ Metoprolol（碱性化合物）

 

可选择的混合比例

不改变流动相条件，通过改变SCX填料的混合比例即可实现分析时间的缩短和分离模式的改变。

 

 

产品一览表

■CR 1 : 4

 

官能基团	C18				C8, Ph, C1, CN			NH2	C18 + SCX	其他
类型	ACR	MG UG AG	IF IF2 AQ SG	BB	DD	UG AG	SG	UG SG	CR	PFP	ADME
pH值范围	1-10	2-10	2-9	1-11	1.5-10	2-10	2-9	2-8	2-7	1-10	2-9

 

※根据测定温度以及流动相中的有机溶剂含量而有所变化。

※C₁和CN填料由于官能基较短，与C₈和Phenyl相比，耐久性有所下降。

3) 请过滤（0.45 μm以下滤膜）流动相去除杂质后再进行充分脱气。

4) 为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞，建议使用线上过滤器。

5) 新色谱柱使用色谱柱报告中标示的流动相封存。若要置换成含无机盐的流动相，请注意置换程序，不要造成盐析出。

6) 使用含有离子对试剂等表面活性剂的流动相，色谱柱的寿命会变短。

7) C₁₈ AQ在使用100%水相作为流动相时，根据条件不同，也有可能会出现寿命极度缩短的情况。如果一定要使用100%水相作为流动相，请在酸性条件下使用磷酸盐缓冲液，这样能够延长色谱柱的寿命。
8) 以下使用方法一般会导致色谱柱劣化，请避免此类操作。
大幅变动pH或频繁变更流动相的组成。
在超过15 MPa(IF为40 MPa)的柱压下连续使用，或者压力急剧变化超过数MPa。

 

样品溶液的配制

1) 请尽量以流动相对样品进行溶解。
2) 样品溶液若采用洗脱能力强的溶剂，会造成色谱峰的展宽。
3) 如样品不易溶于流动相中，进样后会在色谱柱中析出，造成柱压的急剧上升，故需注意。
4) 样品溶液的pH请不要超过色谱柱的可用pH范围。

 

分析时的注意事项

 

1) 在使用C₁₈、C₈、 Phenyl、C₁和CN柱时：

　a. 请使用与分析柱相同填料的预柱。使用不同填料或其他公司硅胶系化学键合型填料的预柱时，可能无法得到正常的色谱峰。

　b. 中性条件下分析质子化的碱性化合物时，提高流动相中缓冲盐浓度、有机溶剂含量和温度都能使峰形变好。

　c. 使用强酸性或强碱性的流动相后，碱性化合物的峰形会变差。

 

2) 在使用NH₂柱时：

●糖类的分析

　a. 请设定乙腈/水的流动相条件。乙腈的浓度越高，则对糖的保留能力越强。

　b. 若采用含甲醇或缓冲盐的流动相，峰会展宽。

　c. 将其他公司硅胶类NH₂色谱柱流动相条件中的乙腈含量增加5 vol%，使用我公司NH₂柱可重现几乎相同的色谱图。

　d. 若将糖的水溶液作为样品注入，谱峰会展宽。请使用含乙腈50%以上的溶剂来配制糖类样品。

　e. 曾在酸性条件下使用过的色谱柱，糖类分析的保留时间、峰形均会发生变化。

●离子性物质的分析

　a. 请设定乙腈/磷酸缓冲液且具有一定pH值的流动相条件。

　b. 考察流动相条件时，按照pH由高到低的顺序进行考察。

　　如果曾经在低pH下使用，填料的表面将无法回到初始状态。

　c. 有时需要长时间平衡色谱柱(24小时以上)。平衡所需时间与通液量和盐浓度紧密相关，因此，时间紧急时请提高流速，或pH不变而增加流动相的盐浓度来进行平衡。

　d. 抗坏血酸的色谱峰有时会出现拖尾现象。

●尿囊素的分析

　尿囊素在pH 2～8范围内未离子化，请使用磷酸缓冲液作为流动相进行分析。

　流动相例：25 mmol/L KH₂PO₄ / CH₃CN = 20 / 80, pH = 1.5（H₃PO₄）

 

3) 在使用CR柱时：

CR柱的填料是由C₁₈填料和SCX填料混合而成的。因此，可通过反相分配和离子交换两种模式来进行分离。离子交换模式中，一般随以下几点洗脱行为发生变化：

　pH（为了使样品充分离子化，流动相pH最好与样品的pKa相差±2.0以上。）

　盐浓度

　有机溶剂量

　盐种类

 

色谱柱的保存

1) 请用附带的堵头密封，保存在温差小的阴冷处。

2) 在使用了TFA等强有机酸或碱(pH>8)的流动相之后，请使用与所选用的流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液进行置换（避免只用水来进行置换）。若是一周以上的长期保存，请进一步使用乙腈进行置换。

3) 若是一个月以上的长期保存，使用不会盐析的溶剂冲洗后，用出厂时的溶剂置换并用附带的堵头密封，保存在冷暗处。

4) 请尽量避免使用100%水相清洗色谱柱。

 

色谱柱的连接

请按照图1所示进行配管连接。若配管不匹配，特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时，锥箍前端的长度（图1中的V）与尾端接头的长度（图1中的L）经常会不同，因而引发故障。

若L＞V，会产生死体积，甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象，并且分离变差。

若L＜V，由于锥箍无法密封，所以会导致漏液。
※ 频繁更换色谱柱，可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。这种情况下若进一步拧紧，螺母的头部可能会发生断裂。

图1 色谱柱的连接图

 

故障与对策

使用高效液相色谱法进行测定时所出现的问题，存在各种原因。但由于无法将其一一列举，故在此只说明色谱柱及其周边较容易出现的问题。