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Proteonavi

物性值

官能团 细孔径
(nm)
粒径
(μm)
比表面积
(m2/g)
C% 密度
(μmol/m2)
pH范围 USP
C4 (丁基) 30 5 105 3.3 3.2 2~10 L26

 

优越的耐酸性

各公司蛋白质分析用色谱柱的耐久性比较

 

填料表面的蛋白吸附减少,即使样品量少也能被检出

从分析到制备的规模扩大化也很容易

标准蛋白质分离模式的比较

 

 

标准多肽分离模式的比较

 

低分子量的蛋白质•多肽(分子量在1万以下)在分析时,有不同种类的色谱柱可供选择

●在添加TFA的酸性条件下进行分析时,可结合分析目的选择具有优越耐酸性的CAPCELL PAK C18 ACR和CAPCELL PAK C8 DD等色谱柱。

 

胎球蛋白的胰蛋白酶消化物

 

 

色谱柱:CAPCELL PAK C18 ACR; 1.0 mm i.d. × 150 mm

流动相:(A) 0.05 vol% TFA (B) 0.05 vol% TFA, CH3CN

    B% 10%(0 min)→50%(70 min)

流 速:50 μL/min

温 度:40℃

检 测:UV 210 nm

进样量:1 μL

样品浓度:消化反应前胎球蛋白浓度为7.5 mg/mL

 

高分离度的快速分析(梯度)

 


[常规条件]

色谱柱:CAPCELL PAK C18 MG S3; 1.0 mm i.d. × 50 mm

流动相:(A) 0.05 vol% TFA (B) 0.05 vol% TFA, CH3CN

    B% 10%(0 min)→50%(45 min)→50%(50 min)

流 速:50 μL/min

温 度:35℃

检 测:UV 210 nm

色谱仪:NANOSPACE SI-2

 

●进行少量样品分析时,建议使用微柱。

 

细胞色素C(胰蛋白酶水解物)Tryptic Digest of Cytochrome-C…

 

 

色谱柱:CAPCELL PAK C18 MG S3; 0.3 mm i.d. × 150 mm

流动相:(A) 0.05 vol% HCOOH (B) 0.05 vol% HCOOH, CH3CN

    B% 10%(0 min)→50%(60 min) Gradient

流 速:5 μL/min

温 度:40℃

检 测:ESI MS

进样量:10 μL

样 品:6种蛋白质(STD),溶解于培养液

※ 1 μL/mL = 1 ppm

 

肌红蛋白(胰蛋白酶水解物)Tryptic digest of myoglobin

 

 

色谱柱:CAPCELL PAK C18 MG S3; 0.3 mm i.d. × 150 mm

流动相:(A) 0.05 vol% HCOOH (B) 0.05 vol% HCOOH, CH3CN

    B% 10%(0 min)→50%(60 min) Gradient

流 速:5 μL/min

温 度:40℃

检 测:UV 210 nm

进样量:10 μL

样 品:6种蛋白质(STD),溶解于培养液

※ 1 μL/mL = 1 ppm
 

产品一览表

■Proteonavi

 

产品编号 类型 粒径
(μm)
内径
(mm)
长度
(mm)
F80200 Proteonavi 5 2.0 50
F80201 Proteonavi 5 2.0 150
F80202 Proteonavi 5 2.0 250
F80203 Proteonavi 5 4.6 50
F80204 Proteonavi 5 4.6 150
F80205 Proteonavi 5 4.6 250
F80214 Proteonavi 5 10 150
F80215 Proteonavi 5 10 250
F80224 Proteonavi 5 20 150
F80225 Proteonavi 5 20 250
F80234 Proteonavi 5 30 150
F80235 Proteonavi 5 30 250
F80271 Proteonavi 20 4.6 250
F80281 Proteonavi 20 20 250
F80282 Proteonavi 20 50 250
F11530 Proteonavi 柱芯 (2PCS) 5 2.0 10
F11531 Proteonavi 柱芯 (2PCS) 5 4.0 10
 

Proteonavi高效液相色谱柱使用说明书

 

在此,非常感谢您选购我公司的Proteonavi色谱柱。
Proteonavi是采用在多孔球形硅胶填料表面键合丁基(C4)的高性能蛋白质•多肽分析专用色谱柱。该填料既具有硅胶类填料的高分离能力和耐压性,又具有耐酸性、抑制蛋白质的吸附等特长。
为了能够长期且稳定地使用Proteonavi色谱柱,请在熟读该使用说明书后进行正确使用。

色谱柱的使用

1) 强烈撞击可能会造成色谱柱劣化,请小心谨慎使用。
2) 请在压力指示为0时进行色谱柱的安装和拆卸。
3) 色谱柱最大使用压为20 MPa。

色谱柱的安装

1) 色谱柱的接头使用了外径1/16英寸配管的螺头(MALE NUT)。请确保装置的配管接头正确连接,并且锥箍的顶端已插入接头内侧(参照图1)。
2) 安装色谱柱之前,请将装置配管内的液体置换成所用的流动相。
※请确认色谱柱出厂时的溶剂(记录在色谱柱附带的报告中),并注意盐析现象等。
3) 请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱。

分析

 

流动相


1) 可用流动相的种类与一般化学键合型硅胶类色谱柱中所使用的流动相相同。
2) Proteonavi的可用pH范围为2~10。
可用pH范围是以保留时间和理论塔板数不会提早减少为评价基准的。为防止色谱柱的早期劣化,请注意流动相的pH不要超过上述范围。如果pH发生大幅度的变化,会引起重现性变差、色谱柱提前劣化等问题。
在有机溶剂含量少、色谱柱温度高等条件下,耐酸耐碱性能会降低。
3) 请过滤(0.45 μm以下滤膜)流动相去除杂质后再进行充分脱气。
4) 为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞,建议使用线上过滤器。
5) 新色谱柱使用色谱柱报告中标示的流动相封存。若要置换成含无机盐的流动相,请注意置换程序,不要造成盐析出。
6) 使用含有离子对试剂等表面活性剂的流动相,色谱柱的寿命会变短。
7) 使用100%水相作为流动相时,根据条件不同,可能会出现寿命极度缩短的情况。
8) 以下使用方法一般会导致色谱柱劣化,请避免此类操作。
大幅变动pH或频繁变更流动相的组成
在超过15 MPa的柱压下连续使用,或者压力急剧变化超过数MPa

 

样品溶液的配制


1) 请尽量将样品溶解在流动相中进行分析。
2) 样品溶液若采用洗脱能力强的溶剂,会造成色谱峰的展宽。
3) 样品若不易溶于流动相中,进样后可能会在色谱柱中析出,造成柱压的急剧上升,故需注意。
4) 样品溶液的pH请不要超过色谱柱的可用pH范围。

 

分析时的注意事项


1) 请使用与分析柱相同填料的预柱。
使用不同填料或其他公司硅胶系化学键合型填料的预柱时,可能无法得到正常的色谱峰。
2) 梯度分析结束时,请用有机溶剂含量高的流动相进行置换,保存方法请参照“色谱柱的保存”。

色谱柱的保存

1) 请用附带的堵头密封,保存在温差小的阴冷处。
2) 一周以上的长期保存,请使用乙腈进行置换,并注意不要出现盐析。
3) 请尽量避免使用100%水相清洗色谱柱。

色谱柱的连接

请按照图1所示进行配管连接。若配管不匹配,特别是直接使用其他类型色谱柱所用配管时,锥箍前端的长度(图1中的V)与尾端接头的长度(图1中的L)经常会不同,因而引发故障。
若L>V,会产生死体积,甚至出现色谱峰展宽或拖尾现象,并且分离变差。
若L<V,由于锥箍无法密封,所以会导致漏液。
※ 频繁更换色谱柱,可能会导致螺头的锥箍损坏而发生漏液现象。这种情况下若进一步拧紧,螺母的头部可能会发生断裂。

图1 色谱柱的连接图

 

故障与对策

使用高效液相色谱法进行测定时所出现的问题,存在各种原因。但由于无法将其一一列举,故在此只说明色谱柱及其周边较容易出现的问题。

 

问题现象 原因 对策
色谱柱压升高 异物堵塞
①流动相、样品溶液中杂质、不溶物
②配管内的水垢
③活塞密封圈的碎片
④样品成分的析出
・预先用滤膜对流动相、样品溶液进行过滤。
・安装线上过滤器。
・清理配管及更换活塞密封圈。
・使用流动相配制样品溶液。
色谱峰分裂、拖尾、展宽 ①由于配管连接错误导致产生死体积
②流动相条件不适合
・离子抑制法:抑制不充分(样品量过多)
・离子对法:离子对试剂浓度不足(样品量过多)
③色谱柱劣化
※若色谱柱劣化或填充层出现裂隙,则无法进行修复。
・重新连接配管。
・考察pH、盐浓度、样品量等。
・考察离子对试剂浓度、pH、样品量等。
・通过柱效检测来确认色谱柱性能
保留时间延迟或不稳定 ①漏液(根据泵压值进行判断)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
・检查泵、配管系列的漏液情况。
・充分平衡。
保留时间变短 ①使用强酸或碱导致配位基断裂(劣化)
②流动相条件不适合
③色谱柱的平衡时间不够
・充分平衡。

 

Proteonavi在出厂前已进行了严格的性能检查。但是万一出现不合格产品,请麻烦您联系我公司。
但是,若未按照色谱柱寿命相关事项或上述使用注意事项进行使用而导致劣化时,我们不能承担该类责任,望请谅解。
收到商品后10天以内若无投诉,即可认定为合格品。在此之后不能再更换,望请谅解。

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