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GB 5009.82-2016 食品中维生素E的分析-CAPCELL PAK PFP

维生素E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是最主要的抗氧化剂之一。维生素E对免疫系统功能的发挥起着重要的作用,调节血小板的黏附力,防止血小板凝结。同时,维生素E作为抗氧化剂,能防止暴露于自由基而造成的细胞损伤。
《GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》中,色谱条件规定如下:


5.3 色谱参考条件
色谱参考条件列出如下:
a) 色谱柱:C30柱(柱长250 mm,内径4.6 mm,粒径3 μm),或相当者;
b) 柱温:20℃;
c) 流动相:A:水;B:甲醇,洗脱梯度见表1;
d) 流速:0.8 mL/min;
e) 紫外检测波长:维生素A 为325 nm;维生素E 为294 nm;
f) 进样量:10 μL;
g) 标准色谱图和样品色谱图见C.1。
注1:如难以将柱温控制在20℃±2℃,可改用PFP柱分离异构体,流动相为水和甲醇梯度洗脱。
注2:如样品中只含α-生育酚,不需分离β-生育酚和γ-生育酚,可选用C18柱,流动相为甲醇。
注3:如有荧光检测器,可选用荧光检测器检测,对生育酚的检测有更高的灵敏度和选择性,可按以下检测波长检测:维生素A激发波长328 nm,发射波长440 nm;维生素E激发波长294 nm,发射波长328 nm。


然而在实际工作中,C30色谱柱可能并不是很常用,将柱温控制在20℃±2℃也比较有难度,而寻找其他替代柱也需花费时间、精力和人力去摸索条件,将为繁忙的检测、研究工作带来不必要的麻烦。
因此,大阪曹達尝试使用键合五氟苯基的全多孔型色谱柱CAPCELL PAK PFP进行分析,在简单的等度条件下即实现了4种维生素E的快速保留与良好分离;同时,PFP色谱柱对异构体拆分等方面的分析也具有优势,可作为常备柱,是您工作的好帮手!
废话不多说,让我们来看看数据吧~


α-, β-, γ-, δ-维生素E结构式如下:

 

使用CAPCELL PAK PFP色谱柱对这4种维生素E进行分析,结果如图1所示。

 

图1 CAPCELL PAK PFP色谱柱分析色谱图

 

*注:峰上标数字为分离度。


HPLC Conditions
色谱柱: CAPCELL PAK PFP S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相: 水/ 甲醇= 10/ 90
流 速: 1mL/ min
温 度: 35°C
检 测: PDA 292nm
进样量: 5µL


如图1,在简单的等度条件下即可完成4种维生素E的良好保留与分离。
其中,δ-与β-维生素E间分离度为3.92,β-与γ-维生素E间分离度为1.96,γ-与α-维生素E间分离度为3.73,均符合分离度要求。


接下来,为提供更多色谱柱选择,我们在该条件下对比了下列3款具有不同特性的色谱柱:
★SPOLAR C18——对脂溶性维生素具有一定拆分能力的普适型C18柱
★SUPERIOREX ODS——高含碳量C18柱(含碳量为24%)
★CAPCELL PAK ADME——键合立体笼状金刚烷基团、对同分异构体具有一定拆分能力

 

结果如图2、3所示:

 

图2 SPOLAR C18色谱柱分析色谱图

 

图3 CAPCELL PAK ADME色谱柱色谱图

 

HPLC Conditions
色谱柱: SPOLAR C18 / CAPCELL PAK ADME S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相: 水/ 甲醇= 10/ 90
流 速: 1mL/ min
温 度: 35°C
检 测: PDA 292nm
进样量: 5µL
样 品: α, β, γ, δ-维生素E的浓度分别为180µg/mL, 372.2µg/mL, 159.2µg/mL, 170µg/mL

 

由图2、图3可知,在SPOLAR C18及CAPCELL PAK ADME色谱柱上,4种维生素E在50min内均未能得到有效分离。
而在C18 SUPERIOREX ODS色谱柱上,4种维生素E在70min内尚未溶出(在此未给出该结果)。对此,继续使用该色谱柱,将流动相更换为100%甲醇、100%乙腈分别进行尝试,结果如图4。

 

图4 SUPERIOREX ODS色谱柱分析色谱图

 

HPLC Conditions
色谱柱: SUPERIOREX ODS S5; 4.6mm i.d.×250 mm
流动相: 100%甲醇; 100%乙腈
流 速: 1mL/ min
温 度: 35°C
检 测: PDA 292nm
进样量: 5µL
样 品: α, β, γ, δ-维生素E的浓度分别为180µg/mL, 372.2µg/mL, 159.2µg/mL, 170µg/mL

 

如图4,使用C18 ODS色谱柱在100%有机相条件下依然未能取得4种维生素E的有效分离。


综上所述,使用键合五氟苯基的全多孔型色谱柱CAPCELL PAK PFP,在水 / 甲醇 = 10 / 90的等度条件下,对4种维生素E进行分析,可在16min内得到各物质之间的良好分离与保留;而不论是对脂溶性维生素具有一定拆分能力的普适型色谱柱SPOLAR C18、含碳量高达24%的C18柱SUPERIOREX ODS,还是具有同分异构体拆分能力的CAPCELL PAK ADME色谱柱,均未能得到良好结果。


结论:本数据充分体现了CAPCELL PAK PFP色谱柱具有的特殊分离选择性。

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