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食品中抗坏血酸的测定 方法参照GB 5009.86-2025

抗坏血酸又称维生素C，是在世界各国均为被批准使用的合法食品添加剂，具有增加营养、抗氧化、保持食品色泽与风味等功能。

 

本实验按照《GB 5009.86-2025 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定》第一法-液相色谱法，使用SUPERIOREXII ODS S5；4.6 mm i.d ×150 mm 色谱柱，对抗坏血酸标准品以及茶味饮料样品进行检测，并对标准曲线、精密度、检出限等进行考察。

 

1.1  抗坏血酸标准品分析结果及标准曲线的制作

按照国标要求方法，配制0.05 µg/mL，0.5 µg/mL，1.0 µg/mL，2.0 µg/mL，5.0 µg/mL和10.0 µg/mL系列标准工作液进行标准曲线的制作。以峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标，绘制标准曲线。L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准曲线（如图1、图2所示），二者均在0.05 µg/mL~10.0 µg/mL浓度范围内线性良好，相关系数 r=0.9999。

图1  L-抗坏血酸标准品浓度-峰面积标准曲线图

图2  D-异抗坏血酸标准品浓度-峰面积标准曲线图

 

1.2  精密度

以2.0 µg/mL浓度标准品连续进样6针（如图3所示），得到峰面积RSD%分别为0.54%和0.79%，精密度良好。

 

1.3  定量限

以标准品计算该方法定量限约为0.29 mg/100 g。

 

1.4  样品测定

对超市购买茶味饮料样品进行分析，获得结果（如图4所示），该茶味饮料中能够检出L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸峰。

图3  抗坏血酸标准品分析谱图

图4  茶饮料样品分析结果

【色谱条件】
色谱柱：SUPERIOREXII ODS S5; 4.6 ×150 mm；
流动相：量取水900 mL于烧杯中，吸取40%TBAH溶液3.25 mL、称取乙酸铵3.85 g置于水中，然后加入TCEP 50 mg，再加入乙腈10 mL，混匀后用冰乙酸(约3 mL)调pH 至4.5~5.0;最后加水稀释至1 L，混匀；超声除去气泡；
柱温：25 ℃；
流速：1.0 mL/min；
检测：UV 265 nm；
进样量：10 μL；
标准品：如前所述的系列标准工作液；
样品：准确吸取2 mL茶饮料样品于10 mL容量瓶，于上述10 mL容量瓶中加入TCEP溶液4 mL，再加入TCA 溶液2 mL混匀，静置反应5 min，用水定容，混匀，离心。吸取离心后的上清液1 mL于10 mL容量瓶中，加乙酸铵溶液1 mL，用流动相定容，混匀，此样液为稀释样液。取适量过0.22 µm 水系微孔滤膜至棕色进样瓶中，供液相色谱测定。

 

分析注意事项

 

1、由于该方法流动相配置较为复杂，且含有离子对试剂，建议新柱初次使用时小流速平衡过夜，后续使用可平衡约1h左右进样，平衡不充分时，保留时间漂移，且分离较差。

2、增加柱温或调低pH值可增加分离度。

3、本实验使用5 µm常规色谱柱进行分析，可考虑使用更小粒径色谱柱来增加分离度。

 

综上所述，使用大曹三耀SUPERIOREXII ODS S5；4.6mm i.d ×150mm 色谱柱，按照《GB 5009.86-2025 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定》第一法-液相色谱法进行分析，可得到良好分析结果。