食品中维生素B6的LCMS测定和快速分析 方法参照GB 5009.154-2023
按照《GB 5009.154-2023 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》中第一法 液相色谱-串联质谱法，对维生素B6标准品及实际样品（奶粉）进行了测定，并建立了快速分析方法。
1 标准品分析
按照《GB 5009.154-2023 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》中第一法 液相色谱-串联质谱法，使用CAPCELL CORE PFP色谱柱，根据柱型调整流速（0.4 mL/min→0.2 mL/min）及进样量（10 µL →1 µL）后，结果如图1所示，吡哆醛、吡哆醇和吡哆胺能够良好分离及检测，由于柱长的缩短比标准图谱时间略短。
图1 标准品分析结果
【色谱条件】
色谱柱：CAPCELL CORE FPF S2.7; 2.1 ×100 mm；
流动相：A，10 mmol/L 甲酸铵2%甲酸水溶液；B，0.1%甲酸-甲醇
B% 1%(0 min) -1%(0.5 min) -5%(2 min) -10%(2.2 min) -13%(4.8 min) -100%(5 min) -100%(8 min) -1%(8.2 min) -1%(12 min)；
柱温：25 ℃；
流速：0.2 mL/min；
检测：SEIEX 5500; MRM；
进样量：1 μL；
标准品：0.04 µg/mL。
标准品连续进样6针，分别计算吡哆醛、吡哆醇和吡哆胺RSD为0.77%、2.08%和1.11%，精密度良好。
对维生素B6系列浓度标准品（0.0015-0.08 µg/mL）进行分析，能够得到良好线性结果（图2-4），但不同质谱响应差别较大，建议根据灵敏度情况对线性范围再考查。
图2 线性分析结果（吡哆醛）
图3 线性分析结果（吡哆醇）
图4 线性分析结果（吡哆胺）
2 样品分析
对2种奶粉样品进行前处理后分析，得到结果如图5、图6所示（1.2 min-4.5 min切入质谱检测），样品1中能够检测出吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺峰，样品2中只有吡哆醇峰。
图5 奶粉样品1分析结果
图6 奶粉样品2分析结果
【色谱条件】
色谱柱：CAPCELL CORE FPF S2.7; 2.1 ×100 mm；
流动相：A，10 mmol/L 甲酸铵2%甲酸水溶液；B，0.1%甲酸-甲醇
B% 1%(0 min) -1%(0.5 min) -5%(2 min) -10%(2.2 min) -13%(4.8 min) -100%(5 min) -100%(8 min) -1%(8.2 min) -1%(12 min)；
柱温：25 ℃；
流速：0.2 mL/min；
检测：SEIEX 5500; MRM；
进样量：1 μL。
3 快速分析结果
在前期分析基础上，根据实际出峰情况对梯度条件进行了优化，此时整体分析时间可缩短至5 min，结果如图7所示，有快速分析需求时，可考虑使用。
【色谱条件】
色谱柱：CAPCELL CORE FPF S2.7; 2.1 ×100 mm；
流动相：A，10 mmol/L 甲酸铵2%甲酸水溶液；B，0.1%甲酸-甲醇
B% 1%(0 min) -1%(0.5 min) -15%(1.5 min) -100%(2 min) -100%(3 min) -1%(3.1 min) -1%(5 min)；
柱温：25 ℃；
流速：0.4 mL/min；
检测：SEIEX 5500; MRM；
进样量：1 μL；
浓度：0.04 µg/mL。
4 分析注意事项
该方法梯度中最高比例有机相为100%甲醇条件，若前处理环节中过量加入酶，在甲醇条件下长期进样有酶析出风险，建议可根据实际情况适当降低洗脱有机相比例。
综上所述，使用CAPCELL CORE PFP S2.7; 2.1 mm i.d. × 100 mm色谱柱，按照《GB 5009.154-2023 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》中第一法 液相色谱-串联质谱法，能够获得良好检测结果。
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