五维他口服液中维生素的分析
五维他口服液中所含维生素B1是糖代谢所需辅酶的重要组成成份，维生素B2为组织呼吸所需重要辅酶的组成成份，烟酰胺是脂质代谢、组织呼吸的氧化作用所必需的辅酶I及II的组分，维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢，泛酸钙为辅酶A的组分，参与糖、脂肪、蛋白质的代谢。
按照客户要求，尝试对五维他口服液中的烟酰胺及其峰前杂质进行分离。
首先，我们按照客户提供条件，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱对客户提供的五维他口服液样品进行分析，结果如图1所示，烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.28，未得到分离。
图1 五维他口服液分析色谱图（原条件）
注：峰上标数字为分离度（下同）。
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d. × 250 mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2 g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500 ml，加三乙胺1.5 ml，用磷酸调节pH值至2.3） B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 1.0 mL / min
温 度： 30 °C
检 测： PDA 275nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
在此基础上降低柱温，在25°C条件下再次进行分析，结果如图2所示，烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.35，稍有改善。
图2 五维他口服液分析色谱图（25°C）
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2 g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500 ml，加三乙胺1.5 ml，用磷酸调节pH值至2.3） B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 1.0 mL / min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
进一步降低流速，将流速由1.0 mL/min调整为0.8 mL/min，希望通过延长保留时间来获得更好的分离效果，结果如图3所示，烟酰胺与其峰前杂质分离度为1.49，二者分离情况得到明显改善。
图3 五维他口服液分析色谱图（25°C, 0.8 mL / min）
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2 g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500 ml，加三乙胺1.5 ml，用磷酸调节pH值至2.3） B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 0.8 mL / min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
继续尝试使用分离效果更好的小粒径规格色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 250 mm对五维他口服液样品进行分析，结果如图4所示，烟酰胺与其峰前杂质分离度为2.14，得到基线分离。
图4 五维他口服液分析色谱图（25°C, 0.8 mL/min, AQ S3）
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6mm i.d. × 250mm
流动相： A：庚烷磺酸钠缓冲液（取0.2 g庚烷磺酸钠加水溶解后稀释到500 ml，加三乙胺1.5 ml，用磷酸调节pH值至2.3） B：甲醇
A：B=80：20
流 速： 0.8 mL / min
温 度： 25 °C
检 测： PDA 275nm
样 品： 客户提供五维他口服液样品
进样量： 10 µL
综上，通过对柱温及流速的调整，最终在柱温25°C、流速0.8 mL/min条件下，使用小粒径的CAPCALL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱对五维他口服液中的维生素进行分析，烟酰胺及其峰前杂质可得到基线分离。
返回药品分析列表
上一篇
下一篇