三耀精细化工品销售（北京）有限公司

林可霉素利多卡因凝胶为复方制剂，每克含林可霉素5毫克，利多卡因4毫克。适应症为用于轻度烧伤、创伤及蚊虫叮咬引起的各种皮肤感染。

客户提供林可霉素利多卡因凝胶样品，希望本实验室帮忙通过筛选色谱柱及调节分析条件，依据国家药品标准WS-10001-(HD-0140)-2002方法，实现林可霉素利多卡因凝胶样品的良好分析。

首先，使用能在纯水条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm，对林可霉素利多卡因凝胶样品进行分析，结果如图1所示，利多卡因与其峰后杂质之间分离度为1.77。

图1 CAPCELL PAK C18 AQ分析所得色谱图

注：峰上标数字为分离度。

 

HPLC Conditions ：

色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

流动相： 0.05 mol/L硼砂（pH 6.0） / 甲醇/ 乙腈= 75 / 10 / 15

流 速： 1.0 mL/min

温 度： 30 °C

检 测： PDA 214 nm

进样量： 20 μL

浓 度： 0.4 mg/mL（溶剂为0.05 mol/L硼砂（pH 6.0），过0.22 μm滤膜）

 

为进一步提高利多卡因与其峰后杂质之间的分离度，在原条件基础上将柱温由30℃降低至25℃，并分别使用CAPCELL PAK C18 AQ、CAPCELL PAK C18 MG及高含碳量ODS色谱柱SUPERIOREX ODS进行分析，结果如图2所示。

图2 25℃条件下不同色谱柱分析结果对比

注：峰上标数字为分离度。

 

HPLC Conditions ：

色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

CAPCELL PAK C18 MG S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d. × 150 mm

流动相： 0.05 mol/L硼砂（pH 6.0） / 甲醇/ 乙腈= 75 / 10 / 15

流 速： 1.0 mL/min

温 度： 25 °C

检 测： PDA 214 nm

进样量： 20 μL

样 品： ① 林可霉素，② 利多卡因

浓 度： 0.4 mg/mL（溶剂为0.05 mol/L硼砂（pH 6.0），过0.22 μm滤膜）

 

如图2所示，在柱温25℃条件下使用三款色谱柱进行分析，其中，CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析结果最好，利多卡因与其峰后杂质分离得到最佳分离，分离度为4.23；使用CAPCELL PAK C18 MG色谱柱进行分析时，利多卡因与其峰后杂质分离度为3.27；而使用SUPERIOREX ODS色谱柱分析时，利多卡因与其峰后杂质未得到有效分离。

 

综上，在国家药品标准WS-10001-(HD-0140)-2002方法基础上，将色谱柱柱温由30℃降低至25℃，使用高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ及中等极性色谱柱CAPCELL PAK C18 MG进行分析，均可在25 min内完成林可霉素利多卡因凝胶样品的分析，并得到利多卡因与其峰后杂质之间的良好分离结果。