BP 2015方法复合维生素注射液的定量分析——维生素B1、维生素B6及烟酰胺的分析
复合维生素注射液，用于营养不良及因缺乏维生素B类所引起疾患的辅助治疗，如厌食、脚气病、糙皮病等。
维生素B1又称硫胺素，是碳水化合物代谢所需辅酶的重要组成成分。
维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。
烟酰胺为辅酶Ⅰ及Ⅱ的组分，为脂质代谢、组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。
右泛醇（D-泛醇）又称原维生素B5，进入人体内能转化为泛酸，进而合成辅酶A，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤和粘膜，改善毛发光泽，防止疾病的发生。
（以上列出组分为配方中部分成分，本数据仅介绍前三种化合物的分析，下期将介绍右泛醇的分析数据）
客户提供了复合维生素注射液样品及维生素B1、维生素B6和烟酰胺对照品溶液，并反馈在现有条件下使用C18柱对注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析时，烟酰胺出现杂质干扰，无法准确定量。客户希望本实验室参考BP 2015英国药典方法，筛选合适的色谱柱对复合维生素注射液中的维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析。
依据BP 2015方法，流动相中添加了二乙胺和庚烷磺酸钠，本实验室分别尝试了中等极性的CAPCELL PAK C18 MGII、高极性的CAPCELL PAK C18 AQ、高碳载量的SUPERIOREX ODS以及低极性的CAPCELL PAK C18 UG120色谱柱分别对注射液样品进行分析。
如图1，对几款柱子分析所得结果对比后发现，能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELLPAK C18 AQ所得分离效果最佳，其中，烟酰胺与前后杂质分离度在0.9以上，满足BP方法中不低于0.8的分离度要求。
图1 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果
注：峰上标数字为分离度，下同。
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm （柱号：A6AD 03113）
流动相： 溶液A* / 甲醇/ 乙腈= 800 / 100 / 100
流 速： 1.2 mL/min
柱 温： 30°C
进样量： 20 μL
样 品： 注射液用0.45 μm滤膜过滤
检 测： PDA 280nm
*溶液A：15 mL冰醋酸，2.5 mL二乙胺和1.1 g庚烷磺酸钠溶解至1000 mL水中。
就该结果与客户沟通，客户希望对液相条件进行适当调整，在满足英国药典要求的基础上，进一步实现烟酰胺与其前后杂质之间的基线分离。
首先，我们考察柱温对分离的影响——分别在30°C、35°C、40°C柱温条件下考察分离效果，发现仍在原条件，即30°C条件下分离效果最佳；进一步，尝试调整流动相中有机相的比例，将原条件中各10%的甲醇和乙腈均降低至6%，如图2，烟酰胺与其先后杂质峰之间分离度均在1.70以上，能够得到基线分离的良好结果。
图2 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果（调整条件）
图3 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果（调整条件）局部放大图
HPLC Conditions ：
色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm （柱号：A6AD 03113）
流动相： 溶液A* / 甲醇/ 乙腈= 880 / 60 / 60
流 速： 1.2 mL/min
柱 温： 30°C
进样量： 20 μL
样 品： 注射液用0.45 μm滤膜过滤
检 测： PDA 280nm
*溶液A：15 mL冰醋酸，2.5 mL二乙胺和1.1 g庚烷磺酸钠溶解至1000 mL水中。
综上实验结果，使用能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm，依据BP 2015英国药典方法，通过调整流动相中有机相比例，能够实现复合维生素注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺及杂质的良好分离及准确定量分析。
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